本文關(guān)鍵詞：錦燈籠果實(shí)多糖對(duì)小鼠髓源樹突狀細(xì)胞表型影響及其作用受體初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來,隨著對(duì)植物多糖研究的不斷發(fā)展,人們發(fā)現(xiàn)很多植物多糖都具有良好的免疫調(diào)節(jié)功能。本課題組已經(jīng)對(duì)錦燈籠果實(shí)水溶性多糖(PPSB)的佐劑活性進(jìn)行研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PPSB在白色念珠菌核酸疫苗中具有顯著的免疫增強(qiáng)作用。然而,對(duì)于PPSB具有佐劑效應(yīng)的作用機(jī)制知之甚少。 研究表明,疫苗佐劑輔助抗原激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)幾乎都與樹突狀細(xì)胞(Dendriric cells,DC)的作用有關(guān),DC的成熟是啟動(dòng)特異免疫應(yīng)答的一個(gè)關(guān)鍵步驟,而DC表達(dá)的Toll樣受(Toll-Like Receptors,TLRs)是連接固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的橋梁。 本論文以DC為切入點(diǎn),以TLR4為靶點(diǎn),對(duì)PPSB的免疫增強(qiáng)作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。現(xiàn)將本論文主要研究結(jié)果歸納如下： 1.建立了體外培養(yǎng)獲得小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(Bone marrow derived dendritic cells,BMDC)的技術(shù)體系 本實(shí)驗(yàn)采用兩種方法誘導(dǎo)生成BMDC,并對(duì)兩種方法產(chǎn)生的BMDC進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和表型鑒定。結(jié)果顯示,單獨(dú)使用rmGM-CSF誘導(dǎo)培養(yǎng)至第8天,僅獲得較低比率的BMDC,而共同使用rmGM-CSF和rmIL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)至第5天時(shí),可獲得大量較高比率的未成熟BMDC,因此,本實(shí)驗(yàn)采用共同使用rmGM-CSF和rmIL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)法,第5天獲得未成熟狀態(tài)的BMDC用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2. PPSB促進(jìn)BMDC表面共刺激分子CD80、CD86的表達(dá) 選取上述誘導(dǎo)產(chǎn)生的BMDC進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步探討不同劑量的PPSB對(duì)BMDC表型的影響,采用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)不同劑量的PPSB對(duì)BMDC表面共刺激分子CD80、CD86表達(dá)水平的影響。研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,PPSB可以不同程度的促進(jìn)CD80、CD86的表達(dá),且在10-50ug/ml濃度范圍內(nèi),呈劑量依賴關(guān)系,說明PPSB具有促進(jìn)BMDC表型成熟的作用。 3. PPSB能夠抑制脂多糖(LPS)與BMDC的結(jié)合 為研究PPSB與BMDC的特異性結(jié)合情況,本實(shí)驗(yàn)分別用不同濃度的PPSB和FITC-LPS競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合BMDC表面的TLR4,并以未標(biāo)記的LPS和FITC-LPS與BMDC結(jié)合作對(duì)照,然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞結(jié)合熒光情況。結(jié)果顯示不同濃度的PPSB均能不同程度的抑制FITC-LPS與BMDC的結(jié)合,并且隨著PPSB濃度的升高,FITC-LPS與BMDC結(jié)合的抑制效果依次增強(qiáng),初步推測(cè)PPSB在BMDC表面的受體為TLR4。
【關(guān)鍵詞】：錦燈籠多糖 樹突狀細(xì)胞 TLR4 佐劑
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392;Q946
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 中英文~.寫9-10
• 第一章 引言10-20
• 1 多糖特異性免疫識(shí)別分子機(jī)制的研究現(xiàn)狀10-13
• 1.1 植物多糖對(duì)巨噬細(xì)胞的影響10-11
• 1.2 植物多糖對(duì)DC的影響11-12
• 1.3 植物多糖受體12-13
• 2 DC概述13-15
• 2.1 DC的發(fā)現(xiàn)13
• 2.2 DC在免疫應(yīng)答中的地位13
• 2.3 DC的來源、分類和分布13-14
• 2.4 DC的分化與成熟14
• 2.5 成熟DC誘導(dǎo)初始型T細(xì)胞極化過程14-15
• 3 TLRs概述15-17
• 3.1 TLRs的基本結(jié)構(gòu)及其信號(hào)通路15-16
• 3.2 TLRs在免疫應(yīng)答中的作用16-17
• 4 錦燈籠的研究現(xiàn)狀17-19
• 4.1 錦燈籠的生物學(xué)特征和化學(xué)成分17
• 4.2 錦燈籠的藥理學(xué)研究概況17-19
• 5 本研究目的意義19-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-27
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器20-21
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑20
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-27
• 2.1 BMDC的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)及鑒定21-24
• 2.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)PPSB對(duì)BMDC表型的影響24-25
• 2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)PPSB與BMDC特異性結(jié)合情況25-26
• 2.4 統(tǒng)計(jì)分析26-27
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析27-37
• 1 BMDC的鑒定27-30
• 1.1 倒置顯微鏡下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察27-28
• 1.2 細(xì)胞表面分子表達(dá)水平的檢測(cè)與分析28-30
• 2 PPSB對(duì)BMDC表型成熟的影響30-34
• 2.1 PPSB能夠促進(jìn)BMDC表面共刺激分子CD80的表達(dá)31-33
• 2.2 PPSB能夠促進(jìn)BMDC表面共刺激分子CD86的表達(dá)33-34
• 3 PPSB與BMDC表面受體TLR4特異性結(jié)合情況分析34-37
• 第四章 討論37-40
• 1 體外擴(kuò)增培養(yǎng)法可以獲得大量較高比率的BMDC37-38
• 2 PPSB促進(jìn)BMDC表面CD80、CD86的表達(dá)38-39
• 3 PPSB能夠抑制LPS與BMDC的結(jié)合39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 致謝44

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：329639