目的:探討抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells,EPCs）的自噬對(duì)于細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響,為EPCs治療深靜脈血栓提供一種新的思路。方法:1. Ficoll密度梯度離心法獲取Wistar大鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞（bone marrow-derived mononuclear cells,BMMNCs）,內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)基（EGM-2MV）體外誘導(dǎo)分化為EPCs并進(jìn)行鑒定。2.實(shí)驗(yàn)分五組,對(duì)照組及3-甲基腺嘌呤（3-methlyadenine 3-MA）四個(gè)濃度組,分別為1.25mmol/l、2.5mmol/l、5mmol/l、10mmol/l,采用常規(guī)四氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium MTT）比色法測(cè)定各濃度3-MA及對(duì)照組對(duì)EPCs增殖的作用。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)各濃度3-MA對(duì)EPCs凋亡率的影響及EPCs周期檢測(cè)。4.應(yīng)用單丹（磺）酰戊二胺（Monodansylcadaverine MDC）熒光染色和透射電鏡觀察3-MA給藥后EPCs自噬的發(fā)生及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。5.Western blot檢測(cè)3-MA給藥... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

剛分離的BMMNC呈圓形，較小，大小不一

浮狀態(tài)（圖1）。細(xì)胞很快開(kāi)始貼壁，48h后部分細(xì)胞逐漸變大、伸展，未貼壁的細(xì)胞逐漸縮小、死亡。4-8d細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，形態(tài)多呈梭形、三角形、紡錘形及不規(guī)則形（圖2-3）。第10-12 天，細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶底，呈典型鋪路鵝卵石樣外觀（圖4）。此時(shí)的細(xì)胞數(shù)可達(dá)到（4.5±0.5）×105，能夠滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)的需求。

8圖 3 第 7 天的 EPCs，細(xì)胞梭形，三角形，橢圓形及 圖 4 第 12 天的 EPCs，細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞間相互不規(guī)則外觀（×200） 連接，呈典型鵝卵石樣外觀（×200）2．EPCs免疫組化及免疫熒光鑒定選取目前比較公認(rèn)的特異性標(biāo)志VEGFR-2，CD34和CD133的表達(dá)情況進(jìn)行免疫組化及免疫熒光鑒定，細(xì)胞表面標(biāo)志VEGFR-2，CD34免疫組化檢測(cè)（圖5，6），陽(yáng)性細(xì)胞胞漿呈棕黃色，細(xì)胞表面標(biāo)志CD133免疫熒光鑒定（圖7），熒光顯微鏡下細(xì)胞呈藍(lán)綠色熒光。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Effects of bone marrow-derived endothelial progenitor cell transplantation on vein microenvironment in a rat model of chronic thrombosis[J]. LI Xiao-qiang MENG Qing-you WU Hao-rong Department of Vascular Surgery,Second Affiliated Hospital of Suzhou University,Suzhou 215004,China(Li XQ,Meng QY and Wu HR).  Chinese Medical Journal. 2007(24)
[2]自噬在細(xì)胞生存和腫瘤發(fā)生中的作用[J]. 顏次慧,梁中琴,顧振綸,秦正紅.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2005(03)
[3]凋亡相關(guān)蛋白Survivin及Caspase3在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與凋亡的關(guān)系[J]. 鄭濤,張旭,彭健,黃皓,馬鑫,李宏召.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2005(01)
[4]MTT比色法測(cè)定細(xì)胞毒效應(yīng)的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 張建華,田志剛.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè)). 1997(04)



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