骨重建是骨組織進行修復的重要手段，是一個偶聯(lián)過程，包括骨吸收和隨后進行的骨形成兩部分。破骨細胞（OC）是骨吸收的主要細胞，是由單核細胞融合而成的，來源于單核—巨噬細胞造血干細胞系。破骨細胞為終末分化細胞，數量極少，生存時間有限，目前尚無破骨細胞株可利用。目前學術界公認，脾多潛能干細胞誘導破骨細胞樣細胞體外培養(yǎng)法是研究破骨細胞形成的有效方法。本試驗通過5—氟尿嘧啶刺激脾造血干細胞聚集，進而通過IL-3、IL-6作用形成細胞集落。在粒細胞、巨噬細胞-集落刺激因子（GM-CSF）的作用下，脾多潛能干細胞進一步分化，然后在1，25（OH）₂VitD₃和地塞米松的作用下，誘導形成較大數量的、具有破骨細胞生物特征的破骨細胞樣細胞，這些細胞TRAP染色陽性，與骨片共同培養(yǎng)時，經融合形成多核細胞后可吸收骨形成骨陷窩。為今后對于破骨細胞的研究提供了較好的細胞模型。 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數】：98 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

培養(yǎng)7天的OLC集落x100倍

落加入GM一CSF，7一10天后可以看到大量的圓形或橢圓形細胞。換用1二，25一(OH)ZVitD:和地塞米松后，可見細胞數目較前相對減少，細胞體積增大，胞漿多核，細胞形態(tài)不規(guī)則(圖2)。破骨細胞樣細胞表現(xiàn)為:質膜邊緣不規(guī)則、有突起和偽足，胞內有數個以上或十幾個細胞核，胞漿內可見大小不等的空泡。二.OLC的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)檢查經TRACP染色后，鏡下多數多核細胞和單核細胞胞漿染成紅色(酸性磷酸酶活性部位形成的紅色不溶性沉淀)，經蘇木復染后，可以看到胞核成致密的藍色、圓形，其間可見深藍色小核仁(圖3)。大約80%的細胞TRAP染色后呈陽性反應(圖4)。三.OLC掃描電鏡結果在骨磨片上可見不同形態(tài)和大小的破骨細胞樣細胞形成。一些細胞體積相對較小，扁平多角型，形態(tài)不規(guī)則，無長突起，貼片邊緣有少量短而鈍的胞質突起。這些細胞大小介于25~43xl3一21微米之間(長徑x短徑)。另一些細胞附著在骨片表面，體積大小介于127一167x58一117微米之間(圖5)。由于一些體積較大細胞在細胞中央部分胞膜無界限可分，而在周邊部位可見部分咆膜融合，尚可觀察到細胞間隙，因此推斷這些體積較大細胞為前述較小細胞融合而成(圖6)。而且可以觀察到一些細胞尚在融合過程中。融合形成的破骨細胞樣細胞外形不規(guī)則

經TRACP染色后，鏡下多數多核細胞和單核細胞胞漿染成紅色(酸性磷酸酶活性部位形成的紅色不溶性沉淀)，經蘇木復染后，可以看到胞核成致密的藍色、圓形，其間可見深藍色小核仁(圖3)。大約80%的細胞TRAP染色后呈陽性反應(圖4)。三.OLC掃描電鏡結果在骨磨片上可見不同形態(tài)和大小的破骨細胞樣細胞形成。一些細胞體積相對較小，扁平多角型，形態(tài)不規(guī)則，無長突起，貼片邊緣有少量短而鈍的胞質突起。這些細胞大小介于25~43xl3一21微米之間(長徑x短徑)。另一些細胞附著在骨片表面，體積大小介于127一167x58一117微米之間(圖5)。由于一些體積較大細胞在細胞中央部分胞膜無界限可分，而在周邊部位可見部分咆膜融合，尚可觀察到細胞間隙，因此推斷這些體積較大細胞為前述較小細胞融合而成(圖6)。而且可以觀察到一些細胞尚在融合過程中。融合形成的破骨細胞樣細胞外形不規(guī)則，可見較長突起。


本文編號：3290178