骨重建是骨組織進(jìn)行修復(fù)的重要手段，是一個(gè)偶聯(lián)過(guò)程，包括骨吸收和隨后進(jìn)行的骨形成兩部分。破骨細(xì)胞（OC）是骨吸收的主要細(xì)胞，是由單核細(xì)胞融合而成的，來(lái)源于單核—巨噬細(xì)胞造血干細(xì)胞系。破骨細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，數(shù)量極少，生存時(shí)間有限，目前尚無(wú)破骨細(xì)胞株可利用。目前學(xué)術(shù)界公認(rèn)，脾多潛能干細(xì)胞誘導(dǎo)破骨細(xì)胞樣細(xì)胞體外培養(yǎng)法是研究破骨細(xì)胞形成的有效方法。本試驗(yàn)通過(guò)5—氟尿嘧啶刺激脾造血干細(xì)胞聚集，進(jìn)而通過(guò)IL-3、IL-6作用形成細(xì)胞集落。在粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞-集落刺激因子（GM-CSF）的作用下，脾多潛能干細(xì)胞進(jìn)一步分化，然后在1，25（OH）₂VitD₃和地塞米松的作用下，誘導(dǎo)形成較大數(shù)量的、具有破骨細(xì)胞生物特征的破骨細(xì)胞樣細(xì)胞，這些細(xì)胞TRAP染色陽(yáng)性，與骨片共同培養(yǎng)時(shí)，經(jīng)融合形成多核細(xì)胞后可吸收骨形成骨陷窩。為今后對(duì)于破骨細(xì)胞的研究提供了較好的細(xì)胞模型。 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

培養(yǎng)7天的OLC集落x100倍

落加入GM一CSF，7一10天后可以看到大量的圓形或橢圓形細(xì)胞。換用1二，25一(OH)ZVitD:和地塞米松后，可見(jiàn)細(xì)胞數(shù)目較前相對(duì)減少，細(xì)胞體積增大，胞漿多核，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則(圖2)。破骨細(xì)胞樣細(xì)胞表現(xiàn)為:質(zhì)膜邊緣不規(guī)則、有突起和偽足，胞內(nèi)有數(shù)個(gè)以上或十幾個(gè)細(xì)胞核，胞漿內(nèi)可見(jiàn)大小不等的空泡。二.OLC的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)檢查經(jīng)TRACP染色后，鏡下多數(shù)多核細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿染成紅色(酸性磷酸酶活性部位形成的紅色不溶性沉淀)，經(jīng)蘇木復(fù)染后，可以看到胞核成致密的藍(lán)色、圓形，其間可見(jiàn)深藍(lán)色小核仁(圖3)。大約80%的細(xì)胞TRAP染色后呈陽(yáng)性反應(yīng)(圖4)。三.OLC掃描電鏡結(jié)果在骨磨片上可見(jiàn)不同形態(tài)和大小的破骨細(xì)胞樣細(xì)胞形成。一些細(xì)胞體積相對(duì)較小，扁平多角型，形態(tài)不規(guī)則，無(wú)長(zhǎng)突起，貼片邊緣有少量短而鈍的胞質(zhì)突起。這些細(xì)胞大小介于25~43xl3一21微米之間(長(zhǎng)徑x短徑)。另一些細(xì)胞附著在骨片表面，體積大小介于127一167x58一117微米之間(圖5)。由于一些體積較大細(xì)胞在細(xì)胞中央部分胞膜無(wú)界限可分，而在周邊部位可見(jiàn)部分咆膜融合，尚可觀察到細(xì)胞間隙，因此推斷這些體積較大細(xì)胞為前述較小細(xì)胞融合而成(圖6)。而且可以觀察到一些細(xì)胞尚在融合過(guò)程中。融合形成的破骨細(xì)胞樣細(xì)胞外形不規(guī)則

經(jīng)TRACP染色后，鏡下多數(shù)多核細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿染成紅色(酸性磷酸酶活性部位形成的紅色不溶性沉淀)，經(jīng)蘇木復(fù)染后，可以看到胞核成致密的藍(lán)色、圓形，其間可見(jiàn)深藍(lán)色小核仁(圖3)。大約80%的細(xì)胞TRAP染色后呈陽(yáng)性反應(yīng)(圖4)。三.OLC掃描電鏡結(jié)果在骨磨片上可見(jiàn)不同形態(tài)和大小的破骨細(xì)胞樣細(xì)胞形成。一些細(xì)胞體積相對(duì)較小，扁平多角型，形態(tài)不規(guī)則，無(wú)長(zhǎng)突起，貼片邊緣有少量短而鈍的胞質(zhì)突起。這些細(xì)胞大小介于25~43xl3一21微米之間(長(zhǎng)徑x短徑)。另一些細(xì)胞附著在骨片表面，體積大小介于127一167x58一117微米之間(圖5)。由于一些體積較大細(xì)胞在細(xì)胞中央部分胞膜無(wú)界限可分，而在周邊部位可見(jiàn)部分咆膜融合，尚可觀察到細(xì)胞間隙，因此推斷這些體積較大細(xì)胞為前述較小細(xì)胞融合而成(圖6)。而且可以觀察到一些細(xì)胞尚在融合過(guò)程中。融合形成的破骨細(xì)胞樣細(xì)胞外形不規(guī)則，可見(jiàn)較長(zhǎng)突起。


本文編號(hào)：3290178