本文關(guān)鍵詞：霍亂弧菌CRP的碳源利用與甘露醇發(fā)酵轉(zhuǎn)錄水平的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究霍亂弧菌中CRP（cAMP receptor protein）調(diào)節(jié)蛋白、環(huán)腺苷酸受體蛋白（cAMP receptor protein CRP）對(duì)高絲氨酸脫氫（homoserine dehydrogenaseisozymes, HDH）是否具有調(diào)控作用。 CRP蛋白在調(diào)節(jié)多個(gè)通路，特別是在碳源代謝中發(fā)揮重要作用，同時(shí)CRP-cAMP亦調(diào)控著霍亂弧菌甘露醇mtl操縱子，其中mtl操縱子主要是霍亂弧菌O1群El Tor型產(chǎn)毒株（主要為甘露醇慢發(fā)酵株）和非產(chǎn)毒株（主要為甘露醇快發(fā)酵株）的調(diào)控因子。研究霍亂弧菌甘露醇發(fā)酵基因mtlA、mtlD轉(zhuǎn)錄水平差別，用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí)兩種類型菌株對(duì)甘露醇發(fā)酵快慢的原理。在試驗(yàn)中比較霍亂弧菌El Tor型的產(chǎn)毒株與非產(chǎn)毒株兩類菌株在甘露醇發(fā)酵液試驗(yàn)中操縱子基因mtA、mtlD的RNA轉(zhuǎn)錄水平差異，它是否普遍存在于不同年代和不同地區(qū)的菌株中，及其蛋白表達(dá)是否也具有相同的差異性。 方法采用基因搭橋與菌株構(gòu)建的方法。通過(guò)搭橋PCR將HDH基因啟動(dòng)子中CRP潛在結(jié)合位點(diǎn)替換為CRP保守結(jié)合位點(diǎn)，分別將替換前后的啟動(dòng)子序列導(dǎo)入報(bào)告質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到野生珠C7258及CRP缺失株WL7258中比較冷光值的差異�；魜y弧菌中mtl基因簇調(diào)控甘露醇發(fā)酵的結(jié)構(gòu)基因是mtlCBA，檢測(cè)不同年代與不同地區(qū)的菌株，對(duì)24株甘露醇快發(fā)酵菌株和24株甘露醇慢發(fā)酵菌株在甘露醇發(fā)酵液中提取RNA，選取3個(gè)時(shí)間點(diǎn)（0.5h，2h，4h）檢測(cè)mtlCBA基因轉(zhuǎn)錄，用Real-time熒光定量PCR的方法，比較兩類菌株中甘露醇操縱子mtA，mtlD基因轉(zhuǎn)錄水平在培養(yǎng)發(fā)酵液過(guò)程中RNA的差異。另外，利用WB（western）實(shí)驗(yàn)技術(shù)，提取總蛋白，觀察兩類菌株mtlD基因在甘露醇發(fā)酵液中的蛋白表達(dá)差異。 結(jié)果改造前報(bào)告質(zhì)粒在野生株中的冷光值高于CRP缺失株，改造后報(bào)告質(zhì)粒的冷光值在兩株菌中均有升高，但在野生株中的升高值更為明顯。試驗(yàn)中隨機(jī)挑選24株甘露醇慢發(fā)酵株和24株甘露醇快發(fā)酵株，檢測(cè)這兩種類型的菌株在甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)中，甘露醇操縱子mtlCBA的RNA轉(zhuǎn)錄水平的差異，，經(jīng)比較， RNA轉(zhuǎn)錄水平在早期，甘露醇快發(fā)酵株mtlCBA高于甘露醇慢發(fā)酵株；且甘露醇快速發(fā)酵株的操縱子mtlD基因蛋白表達(dá)量也高于甘露醇慢發(fā)酵株。 結(jié)論霍亂弧菌的受體蛋白CRP調(diào)控HDH的轉(zhuǎn)錄，但不是唯一調(diào)控因子，霍亂弧菌兩種菌株甘露醇PTS操縱子的轉(zhuǎn)錄差異，是啟動(dòng)子活性水平流行和非流行株甘露醇發(fā)酵菌株差異的原因。
【關(guān)鍵詞】：霍亂弧菌 CRP 甘露醇 轉(zhuǎn)錄
【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R378
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-14
• 第1章 霍亂弧菌 CRP 的碳源利用與甘露醇轉(zhuǎn)錄差異14-42
• 1.1 材料14-20
• 1.1.1 主要儀器與試劑14-15
• 1.1.2 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件15-17
• 1.1.3 菌株與質(zhì)粒17-20
• 1.2 方法20-29
• 1.2.1 CRP 結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)與搭橋20-21
• 1.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建21-22
• 1.2.3 感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化試驗(yàn)22
• 1.2.4 接合轉(zhuǎn)移22
• 1.2.5 冷光值的測(cè)定22-23
• 1.2.6 核酸操作技術(shù)23-25
• 1.2.7 Total RNA 的提取25-26
• 1.2.8 Ambion，s DNA-freeTM 消除 DNA 污染26
• 1.2.9 逆轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)與 RT-PCR26-27
• 1.2.10 WB 操作試驗(yàn)27-29
• 1.3 結(jié)果29-34
• 1.3.1 CRP 結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)與搭橋29
• 1.3.2 質(zhì)粒構(gòu)建29-31
• 1.3.3 報(bào)告質(zhì)粒在不同菌株中冷光值的測(cè)定31
• 1.3.4 提取 RNA 的質(zhì)量31-32
• 1.3.5 菌株在甘露醇中的轉(zhuǎn)錄差異32-33
• 1.3.6 菌株在甘露醇液中的蛋白表達(dá)差異33-34
• 1.4 討論34-37
• 1.4.1 霍亂弧菌中 CRP 對(duì)高絲氨酸脫氫酶基因的調(diào)控作用34-36
• 1.4.2 霍亂弧菌甘露醇發(fā)酵 mRNA 轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平36-37
• 1.5 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 第2章 綜述 霍亂弧菌 CRP 對(duì)甘露醇代謝的研究進(jìn)展42-52
• 2.1 霍亂弧的基本特性42-45
• 2.1.1 霍亂弧菌流行特征與致病機(jī)制42-43
• 2.1.2 霍亂弧菌的鑒定與分型43-45
• 2.2 霍亂弧菌 CRP 對(duì)甘露醇的影響45-48
• 2.2.1 CRP 蛋白在細(xì)菌中的研究45-46
• 2.2.2 霍亂弧菌中受 CRP 調(diào)節(jié)的基因46-48
• 2.2.3 CRP 未來(lái)應(yīng)用48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介53-54
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)成果54-56
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 金大智;張政;羅蕓;葉菊蓮;程蘇云;吳方;金郁;;多重?zé)晒舛縋CR甄別3種霍亂弧菌相關(guān)毒素基因[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2011年12期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張紅芝;El Tor型霍亂弧菌中甘露醇和山梨醇代謝機(jī)制研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2009年

  本文關(guān)鍵詞：霍亂弧菌CRP的碳源利用與甘露醇發(fā)酵轉(zhuǎn)錄水平的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：328895