發(fā)布時間：2017-04-26 09:19

  本文關鍵詞：骨形成發(fā)生蛋白-2協(xié)同刺激鈦顆粒誘導下的破骨細胞生成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）在磨粒誘導小鼠RAW264.7細胞分化成破骨細胞中的作用。。 方法：1.將小鼠RAW264.7細胞培養(yǎng)于六孔板中，分別加入BMP-2蛋白，鈦顆粒，，BMP-2蛋白和鈦顆粒進行培養(yǎng)，利用免疫組化，實時定量，免疫印跡等手段對分化的破骨細胞進行檢測。2.以腺病毒為基礎將TNF-siRNA克隆入pSilencer2.1-hU6載體中，經(jīng)PCR擴增后克隆入pGEMT載體，隨后克隆入pAd5E1-MCS-CMVeGFP，形成帶有綠色熒光標記的重組腺病毒Ad-TNF-siRNA；將帶有BMP-2的pCDNA3.1載體克隆入pAd5E3-CMV穿梭質(zhì)粒中，然后克隆入pAd5骨架，經(jīng)擴增后將帶有TNF-siRNA的腺病毒骨架和帶有BMP-2的骨架經(jīng)PacI酶切線性化后轉(zhuǎn)染HEK293細胞，最終形成重組腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA。3.將Ad-TNF-siRNA和Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA分別加入含有鈦顆粒的RAW264.7細胞中，與只加入鈦顆粒的細胞做對比，利用免疫組化，免疫印跡，實時定量等手段對分化的破骨細胞進行檢測。 結果：在本實驗中我們發(fā)現(xiàn)BMP-2能夠協(xié)同鈦顆粒刺激小鼠RAW264.7細胞的分化。低濃度的BMP-2（30,50ng/ml）在刺激破骨細胞分化的大小，數(shù)量，細胞核數(shù)量，破骨細胞標志因子及骨吸收面積上都達到最佳刺激濃度，本實驗還表明在破骨細胞分化早期，BMP-2能夠促進c-fos與磷酸化的SMAD1/5/8的表達。BMP-2和鈦顆粒能夠協(xié)同刺激p-JNK,p-P38，p-IkB及p50的表達。同時我們利用腺病毒構建攜帶TNF-α-siRNA（Ad-TNF-siRNA）和同時攜帶TNF-α-siRNA與BMP-2（Ad-BMP2-TNFsiRNA）的載體，將其轉(zhuǎn)染加入鈦顆粒的RAW264.7細胞中，發(fā)現(xiàn)兩個載體都能抑制TNF-α的表達，但只有Ad-TNF-siRNA能夠顯著抑制小鼠破骨細胞的分化，而Ad-BMP2-TNFsiRNA能夠增加破骨細胞分化的大小，數(shù)量，細胞核數(shù)量，破骨細胞標志因子的表達及骨吸收面積的大小，并且其誘導破骨細胞分化水平與鈦顆粒誘導RAW264.7細胞分化成破骨細胞的水平相似。同時Ad-BMP2-TNFsiRNA能夠提高早期破骨細胞分化標志基因c-Fos的表達，增強p-JNK和p-P38信號通路的表達。 結論：本實驗通過探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）在磨粒誘導小鼠RAW264.7細胞分化成破骨細胞中的作用。發(fā)現(xiàn)BMP-2能夠協(xié)同鈦顆粒刺激小鼠RAW264.7細胞的分化，通過激活p-JNK，p-P38和p-IkB信號通路，從而顯著提高破骨細胞分化的大小，數(shù)量，細胞核的數(shù)量及骨吸收的面積。并且BMP-2提高破骨細胞的分化能力不受磨粒及其刺激產(chǎn)物TNF-α的影響。本實驗顯示BMP-2在磨粒誘導破骨細胞的分化中占有關鍵地位。
【關鍵詞】：骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2 鈦顆粒 破骨細胞 腺病毒 腫瘤壞死因子
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-18
• 對象和方法18-31
• 1. 細胞培養(yǎng)18-19
• 2. 鈦顆粒的處理19
• 3. 細胞活性檢測19
• 4. 耐酒石酸鹽酸性磷酸酶（TRAP）檢測19-20
• 5. 骨吸收水平檢測20
• 6. ELISA20
• 7. 實時定量 PCR20-22
• 8. 免疫印跡（Western blot）22-23
• 9. 腺病毒載體的構建23-30
• 10. 統(tǒng)計學方法30-31
• 結果31-41
• 討論41-48
• 結論48-49
• 參考文獻49-56
• 文獻綜述56-67
• 綜述參考文獻64-67
• 致謝67-68
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文68

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4 吳江,陳槐卿,曹慧,周江,張立,K-LPaulSung;鈦顆粒負荷對切應力作用下骨髓間質(zhì)干細胞F-actin表達和DNA含量的影響[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2004年01期

5 王毅;鈦顆粒對成骨細胞功能的抑制[J];國外醫(yī)學.骨科學分冊;1997年04期

6 金山;;鈦顆粒刺激巨噬細胞而釋放的腫瘤壞死因子對人工關節(jié)松動的作用[J];中國實用醫(yī)藥;2008年34期

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10 張亮;陳志榮;吳興臨;金群華;;依那西普對鈦顆粒誘導小鼠骨溶解及破骨細胞增殖的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年09期

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2 吳江;陳槐卿;李良;尹光福;K-L P．SUNG;;鈦顆粒負荷影響骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化能力的機理[A];中國復合材料學術研討會論文集[C];2005年

3 吳江;陳槐卿;K-LP.SUNG;;鈦顆粒負荷影響骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化能力的機理[A];全國首屆青年復合材料學術交流會論文集[C];2007年

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6 韓大慶;張其清;;破骨細胞完善類骨組織體外重建的研究[A];天津市生物醫(yī)學工程學會2006年學術年會論文摘要集[C];2006年

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1 記者 王小龍;科學家發(fā)現(xiàn)破骨細胞抑制劑[N];科技日報;2009年

2 鮑捷;抑制破骨細胞 讓骨質(zhì)疏松剎車[N];健康報;2003年

3 錢錚;日本發(fā)現(xiàn)抑制破骨細胞作用的物質(zhì)[N];中國勞動保障報;2006年

4 錢錚;“W9肽”可抑制破骨細胞生成[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

5 小新;日發(fā)現(xiàn)雌激素可抑制破骨細胞作用[N];中國醫(yī)藥報;2007年

6 ;雌激素可抑制破骨細胞作用[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2007年

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8 范思立;補鈣亟需開創(chuàng)新領域[N];中國經(jīng)濟時報;2007年

9 盧蘇燕;法專家治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移獲進展[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

10 香港麥迪信醫(yī)學出版有限公司供稿;多因素影響骨代謝平衡[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

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1 吳江;鈦顆粒負荷對假體松動過程中主要細胞功能的影響及其機理研究[D];四川大學;2005年

2 錢葉斌;P物質(zhì)對松動關節(jié)假體周圍成纖維細胞的影響[D];上海交通大學;2007年

3 袁平;鈦顆粒對異位骨化局部干預的基礎研究[D];中南大學;2010年

4 吳宗鍵;阿倫磷酸納預防人工關節(jié)無菌松動實驗研究[D];軍醫(yī)進修學院;2001年

5 朱保民;流體剪切力對破骨細胞降鈣素受體（CTR）及整合素αVβ3 mRNA表達影響的研究[D];四川大學;2005年

6 魯秀敏;FGFR1對破骨細胞分化成熟與骨吸收功能的調(diào)控作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2008年

7 童水龍;人破骨細胞刺激因子的結構生物學研究及普通變形桿菌的LAD初步晶體學研究[D];中國科學技術大學;2008年

8 王浩;靶向IL-1和RANKL的聯(lián)合基因治療磨損顆粒導致的無菌性假體松動的研究[D];山東大學;2012年

9 白生賓;氟對破骨細胞增殖的影響及可能的分子機制[D];中南大學;2012年

10 李平;流體剪切力作用下破骨細胞的鈣響應特征及機制[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2012年

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1 孫首選;骨形成發(fā)生蛋白-2協(xié)同刺激鈦顆粒誘導下的破骨細胞生成[D];寧夏醫(yī)科大學;2013年

2 閆永;鈦顆粒負荷下淫羊藿苷對成骨細胞增殖、分化的影響及其機制的研究[D];蘇州大學;2013年

3 陳明;鈦顆粒對MC3T3-E1鼠前成骨細胞基質(zhì)金屬蛋白酶2基因表達影響的實驗研究[D];蘇州大學;2011年

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6 朱光明;大麻素受體CB2抑制劑AM630對鈦顆粒誘導下巨噬細胞影響的實驗研究[D];蘇州大學;2010年

7 王琨;電磁鐵和鈦顆粒共同介導的兔人工關節(jié)假體松動模型[D];青島大學;2013年

8 丁浩;鈦顆粒增強鎂基復合材料力學性能的研究[D];天津大學;2007年

9 劉華;自生納米級二氧化鈦顆粒/鈦合金生物材料制備及生物學特性[D];河北工業(yè)大學;2004年

10 任雯;碳鈦顆粒膜的表面電子發(fā)射特性研究[D];西安工業(yè)大學;2012年

  本文關鍵詞：骨形成發(fā)生蛋白-2協(xié)同刺激鈦顆粒誘導下的破骨細胞生成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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