食品安全和人類的健康息息相關(guān),而在食品安全中農(nóng)獸藥的殘留檢測又是重中之重。本研究制備了具有代表性的三嗪類農(nóng)藥——阿特拉津、β-內(nèi)酰胺類獸藥——氨芐青霉素的單克隆抗體,對抗體進(jìn)行了純化和性質(zhì)鑒定,并對純化后抗體的應(yīng)用進(jìn)行了初步研究。為進(jìn)一步的檢測工作奠定了基礎(chǔ)。本研究的目的是制備高特異性的阿特拉津、氨芐青霉素單克隆抗體。實驗內(nèi)容主要包括半抗原的改造及鑒定、完全抗原的合成及鑒定、實驗動物的免疫、分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立、單克隆抗體的制備、純化、性質(zhì)鑒定及ELISA檢測方法的初步建立等。本研究首先將阿特拉津進(jìn)行羧基化修飾,用3-巰基丙酸取代阿特拉津結(jié)構(gòu)上的氯原子,并對羧基化的阿特拉津運(yùn)用紅外光譜、核磁共振氫譜及質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。用DCC法將羧基化阿特拉津與載體蛋白BSA、OVA偶聯(lián),對獲得的完全抗原進(jìn)行紫外光譜掃描及SDS-PAGE鑒定。計算人工合成完全抗原的偶聯(lián)比為AT:BSA=20:1。用生物合成法將氨芐青霉素與載體蛋白BSA、OVA偶聯(lián),用紫外光譜掃描及SDS-PAGE等方法對獲得的完全抗原進(jìn)行鑒定。計算人工合成完全抗原的偶聯(lián)比為Amp:BSA=12.1:1。實驗動物的免疫采用完全... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
前言
    1 概述
        1.1 阿特拉津概述
        1.2 氨芐青霉素概述
    2 主要研究思路和方法
        2.1 研究技術(shù)路線
        2.2 主要研究方法
    3 研究目的和意義
第一章 完全抗原的合成、鑒定及動物免疫
    實驗一 阿特拉津完全抗原的合成、鑒定及動物免疫
        1 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器及耗材
            1.4 主要溶液的配制
        2 方法
            2.1 阿特拉津的羧基化
            2.2 羧基化阿特拉津的鑒定
            2.3 阿特拉津完全抗原的制備
            2.4 阿特拉津完全抗原的鑒定
            2.5 完全抗原的蛋白定量
            2.6 動物免疫
            2.7 實驗動物血清效價的測定
        3 結(jié)果
            3.1 羧基化阿特拉津的鑒定結(jié)果
            3.2 阿特拉津完全抗原鑒定結(jié)果
            3.3 完全抗原的蛋白定量
            3.4 實驗動物血清效價測定結(jié)果
        4 結(jié)論與討論
    實驗二 氨芐青霉素完全抗原的合成、鑒定及動物免疫
        1 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器及耗材
            1.4 主要溶液的配制
        2 方法
            2.1 完全抗原的制備
            2.2 完全抗原的鑒定
            2.3 完全抗原的蛋白定量
            2.4 實驗動物的免疫及血清效價測定
        3 結(jié)果
            3.1 完全抗原的鑒定結(jié)果
            3.2 完全抗原的蛋白定量
            3.3 實驗動物血清效價的測定結(jié)果
        4 結(jié)論與討論
第二章 單克隆抗體的制備
    1 材料
        1.1 融合用細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器及耗材
        1.4 主要溶液的配制
    2 方法
        2.1 雜交瘤細(xì)胞株的建立
        2.2 單克隆抗體的制備
    3 結(jié)果
        3.1 雜交瘤細(xì)胞篩選與克隆的結(jié)果
        3.2 雜交瘤細(xì)胞分泌抗體穩(wěn)定性測定結(jié)果
        3.3 雜交瘤細(xì)胞的染色體分析結(jié)果
        3.4 雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
    4 結(jié)論與討論
第三章 單克隆抗體的純化、性質(zhì)鑒定及ELISA 方法的初步建立
    1 材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器及耗材
        1.3 主要試劑的配制
    2 方法
        2.1 單克隆抗體的純化
        2.2 單克隆抗體的性質(zhì)鑒定及ELISA 方法的初步建立
        2.3 單克隆抗體的保存
    3 結(jié)果
        3.1 阿特拉津單克隆抗體純化結(jié)果
        3.2 氨芐青霉素單克隆抗體純化結(jié)果
        3.3 阿特拉津單克隆抗體性質(zhì)鑒定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.4 氨芐青霉素單克隆抗體性質(zhì)鑒定及ELISA 方法的初步建立
    4 結(jié)論與討論
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    小分子農(nóng)獸藥免疫檢測研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3280576