目的:構(gòu)建miR-186過表達(dá)慢病毒載體并包裝慢病毒,探討miR-186在人胚胎腎細(xì)胞(HEK293T細(xì)胞系中的感染效率和表達(dá)水平。方法:以Hsa-miR-186前體序列為模板,設(shè)計并合成引物,PCR法擴增pre-miR-186基因序列,并將其克隆到攜帶EGFP/Puromycin的慢病毒載體FV040中,經(jīng)EcoRⅠ和AgeⅠ酶切及測序鑒定后獲得重組慢病毒載體。利用Lipofectamine 2000將重組慢病毒質(zhì)粒FV040Vector和FV040miR-186分別與輔助質(zhì)粒通過共轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞中,48h后收集慢病毒,以FV040Vector慢病毒作為對照組,FV040miR-186作為實驗組,分別感染HEK293T細(xì)胞。感染48h后,觀察HEK293T細(xì)胞中綠色熒光的分布情況,并采用實時熒光定量PCR法檢測miR-186的表達(dá)水平。結(jié)果:測序分析,miR-186過表達(dá)慢病毒與GenBank上公布的miR-186序列完全一致。與對照組（0.838 7±0.145 6）比較,實驗組HEK 293T細(xì)胞中miR-186表達(dá)水平（12.640 0±0.788 4）明顯升高（t=... 

【文章來源】：吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2019,45(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞系、質(zhì)粒、主要試劑和儀器
    1.2 引物序列及合成
    1.3 FV040miR-186過表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、轉(zhuǎn)化及鑒定
    1.4 miR-186過表達(dá)慢病毒的包裝
    1.5 miR-186過表達(dá)慢病毒的收集及濃縮
    1.6 miR-186過表達(dá)慢病毒感染HEK293T細(xì)胞
    1.7 實時熒光定量PCR法檢測HEK293T細(xì)胞中miR-186表達(dá)水平
    1.8 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 miR-186過表達(dá)慢病毒載體圖譜的構(gòu)建
    2.2 miR-186過表達(dá)慢病毒在HEK293T細(xì)胞中的感染效率
    2.3 實時熒光定量PCR法檢測HEK293T細(xì)胞中miR-186表達(dá)水平
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于高通量測序的肝癌circRNA-miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及功能富集分析[J]. 趙靜,楊興武,李京濤,王旗,王亮,王國泰.  臨床肝膽病雜志. 2019(08)
[2]慢病毒載體介導(dǎo)增強型綠色熒光蛋白篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[J]. 李琦,鄒志余,楊瑞澤,鄧洪利,張蕊,周勁松.  西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2019(04)



本文編號：3279014