發(fā)布時(shí)間：2021-07-11 22:11

　　現(xiàn)已研究表明,基因組序列上的變異,即基因多態(tài)性（gene polymorphism）是決定人體對(duì)疾病易感性與抵抗性、疾病臨床表型多樣性以及人體對(duì)藥物治療反應(yīng)差異性的重要因素。我們既往研究表明,效應(yīng)細(xì)胞表面模式識(shí)別受體（CD14、Toll-like receptor 4、MD2）、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的蛋白激酶、以及由炎癥細(xì)胞產(chǎn)生的促炎介質(zhì)如TNF(、IL-1(、IL-6、IL-8,抗炎癥介質(zhì)如IL-4、IL-10、IL-1Ra在決定膿毒癥發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用。因此,其基因表達(dá)上的差異,很可能是部分患者易發(fā)生膿毒癥或/和預(yù)后較差的重要因素。為此,基于目前研究進(jìn)展,本課題重點(diǎn)開展了三方面的系統(tǒng)研究:（1）選擇18個(gè)與炎癥反應(yīng)最為密切的候選基因,通過大規(guī)模直接測序的方法對(duì)這些基因所有重要功能區(qū)域內(nèi)的基因多態(tài)性進(jìn)行了較全面分析;（2）分析了TLR4基因5’區(qū)-1892G→A和-1837A→G堿基變異在重慶人群中的發(fā)生頻率及其SNP基因型和單倍型的分布特點(diǎn);（3）利用生物信息學(xué)和基因克隆技術(shù),探討了TLR4基因5’區(qū)調(diào)控區(qū)以及-1892A和-1837G堿基變異的功能意義。旨在為揭示膿毒癥... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

基因結(jié)構(gòu)和測序區(qū)域示意圖

第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文根據(jù)長程 PCR（Long－PCR）和巢式 PCR（Nest-PCR）的需要，分別設(shè)計(jì)長程和巢式引物。在每對(duì)長程引物范圍內(nèi)設(shè)計(jì)多對(duì)引物，這些引物稱為巢式引物。長程引物對(duì)的上游引物兼作第 1 對(duì)巢式引物的上游引物，長程引物對(duì)的下游引物兼作最后 1 對(duì)巢式引物的下游引物。相鄰巢式引物涵蓋的序列范圍彼此需要一定的重疊，即所謂的步移法（walking）（圖 1-2）。巢式 PCR 引物兼作測序引物。引物長度 18～24 個(gè) bp；Tm 值 58-62℃；擴(kuò)增產(chǎn)物大小：一般長程 PCR 500-2000bp，巢式 PCR 300-500bp。一對(duì)引物之間 Tm 值不應(yīng)超過 1℃。一對(duì)引物之間的序列不應(yīng)包括短核苷酸串連重復(fù)序列(short tandem repeat ,STR)、多聚 A 和多聚 T(n>8)。共設(shè)計(jì)引物 372 條（表 1-2）。

圖 1-3 TLR4 5’區(qū) G→A 堿基變異的識(shí)別和判讀。(A)：AA 型純合子; (B)：GA 型雜合子; (C)：GG 型純合子（七）已有 SNP 數(shù)據(jù)庫的檢索與比對(duì)利用 GeneBank 的 SNP 數(shù)據(jù)庫（dbSNP）（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snpblastByChr.html），檢索我們所發(fā)現(xiàn)的 18 個(gè)炎癥相關(guān)基因的堿基變異是否已有報(bào)道及其與西方人群 SNP 發(fā)生的異同。檢索方法參考美國國立生物信息中心（NCBI）的操作指南（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ Education/ BLASTinfo /information3.html）。結(jié) 果一、中國人群中已知 LPS 受體及其輔助分子 SNP 分布（一）CD14CD14 基因的測序長度為 3169bp，共發(fā)現(xiàn) 4 個(gè) SNP，分布于 5`區(qū)（3 個(gè)）和編碼

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3278675