丙型肝炎病毒（HCV）為單股正鏈RNA病毒是丙型肝炎的病原體。HCV具有高度遺傳多態(tài)性,能夠迅速突變逃逸宿主的免疫應(yīng)答,給疫苗的研究帶來許多的困難。基于現(xiàn)有的對控制HCV感染有關(guān)機(jī)制的認(rèn)識,疫苗應(yīng)當(dāng)具有誘導(dǎo)多種特異性和強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力,也就是CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng),并結(jié)合強(qiáng)烈的交叉中和抗體應(yīng)答。本文在前期構(gòu)建的HCV多表位抗原PCX的基礎(chǔ)上新增了三段保守的HCVB/T細(xì)胞免疫表位,形成了HCV多表位肽段PCXZ。重組表達(dá)得到的多表位抗原PCXZ具有較高陽性HCV識別率的抗原特異性。以PCXZ抗原免疫BALB/c小鼠,在小鼠體內(nèi)激發(fā)出基于Th2的強(qiáng)烈的體液免疫應(yīng)答,同時也有效誘導(dǎo)了特異性的CD4+和CD8’T細(xì)胞免疫應(yīng)答。三段新增表位中Pa表位顯示出良好的B和T細(xì)胞免疫應(yīng)答效果。弗氏佐劑作為PCXZ抗原的免疫佐劑,對體液免疫的影響不顯著,而對T細(xì)胞免疫應(yīng)答有一定的增強(qiáng)作用,但是并不足以改變免疫應(yīng)答形式,仍以Th2免疫應(yīng)答為主。質(zhì)粒DNA （pDNA）疫苗能夠同時誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,尤其是激活了強(qiáng)烈的Thl型CD4+和CD8+T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。本文第三部分將合成的多表... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３?ＨＣＶ基因組組成??Ｆｉｇ．?１－３?ＨＣＶ?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．?（Ａ）?Ｔｈｅ?ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅ?

的保護(hù)作用。本文選擇的Ｓ段表位聯(lián)合之前的五段表位均非常保守。將重組表達(dá)??的多表位抗原ＰＣＸＺ分別同３０份臨床ＨＣＶ患者的血清、２２份正常人血清已經(jīng)??７例ＨＢＶ患者血清進(jìn)行ＥＬＩＳＡ篩選，結(jié)果見圖２－３Ｂ，３０份臨床ＨＣＶ患者的血??清標(biāo)本中，５例呈陰性反應(yīng)；２２份正常人血清樣品中僅１例呈弱陽性反應(yīng)；而７??份抗－ＨＢＶ表面抗原陽性血清樣本中，無一例能被ＰＣＸＺ陽性識別。重組多表位??蛋白ＰＣＸＺ的陽性檢出率可達(dá)８３．３％，表明ＰＣＸＺ抗原能較廣泛地被ＨＣＶ患者??血清陽性識別。??Ａ?ＨＣＶ?ｈｅａ?化?ｙ??ｐａｔｉｅｎｔ?ｓｕｂｊｅｃｔ??３５?ｋＤ??胃??２５?ｋＤ???－—ＰＣＸＺ??化．４１０——??１４．４?ｋＤ??？??巳??＾２：００?????？?———————————’…—??■?■??１．５０?－?■??￡?■??５?－■??安?１．００?－??Ｏ?？?■??０．５０?－?■?■?■??？式Ｉ?＂＂’’ＩＩＩ—Ｉ—Ｉ”’．’ｒ，?？?■?、??０．００?－?＊??Ｎ?刖?ｍａｌ?ＨＣＶ＋?

或陽ｉｓｐｌａｙ載體相連，前者構(gòu)建ｐＶａｘｌ／ｃ－ｐｃｘｚ質(zhì)粒，后者ｐＤｉｓｐｌａｙ／ｐｃｘｚ為模板，??ＰＣＲ擴(kuò)增其中包含的Ｉｇ?Ｋ鏈前導(dǎo)序列、ｐｃｘｚ?Ｗ及ＰＤ畑Ｒ片段，形成ｍ節(jié)ＣＸＺ片??段，然后將ｍ－／？ｃｘｚ再克隆至ｐＶａｘｌ載體內(nèi)構(gòu)建ｐＶａｘｌ／ｍ－ｐｃｘｚ質(zhì)粒。圖３－２為ＰＣＲ??擴(kuò)增的Ｃ－／７ＣＸＺ和片段。各克隆片段經(jīng)ＤＮＡ測序證明完全正確。??Ｍ?１?２?３??１０００?郎一??ｂｐ—??—奪?ｍ－ｐｃｘｚ?７１１?ｂｐ??合?ｃ－ｐｃｘｚ?４巧?ｂｐ??２５０?ｂｐ—??１００?ｂｐ?—??圖３－２?ＰＣＲ擴(kuò)増基因ｐｃｘｚ片段??Ｆｉｇ．３－２?Ｔｈｅ?／？ＣＡ：ｚ?ｆｒａｇｍｅｎ權(quán)?ａｍｐＨｆｉｅｄ?ｂｙ?ＰＣＲ．?Ｌａｎｅ?Ｍ，化ｅ?ＤＮＡ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｉｃｅｒｓ；??Ｌａｎｅ?２，化ｅ?ｏ／？ｃｘｚ；?Ｌａｎｅ?３，化ｅ?ｍ－?／７ＣＸＺ；?Ｌａｎｅ?３，化ｅ?打ｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??２．

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3276080