目的：MEKK3（有絲分裂原活化蛋白激酶激酶激酶）是MAP3K家族的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,表達于哺乳類動物的各種組織中。MEKK3在小鼠的早期胚胎發(fā)育中有著至關(guān)重要的作用。MEKK3敲除可以造成小鼠早期胚胎因血管發(fā)育不全以及卵黃囊結(jié)構(gòu)破損而死亡,提示我們MEKK3可以調(diào)節(jié)血管生成。本課題旨在研究MEKK3在血管生成中所起到的調(diào)控作用,并進一步對其機制加以探討。方法：在體實驗研究運用了條件性和誘導(dǎo)性MEKK3基因敲除小鼠,通過組織的形態(tài)觀察和免疫組化,探知MEKK3基因在血管生成中的功能。體外的細胞生化試驗,包括細胞培養(yǎng)、RT-PCR、Western Blot等,是研究MEKK3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路影響血管生成的手段。結(jié)果：MEKK3缺失可以導(dǎo)致血管生成受損：（1）MEKK3缺失時,R-Smad連接域的磷酸化水平下降,BMP9/TGF-β以及Notch信號傳導(dǎo)通路被激活,其下游靶基因（Ids, Hes和Hey）的表達上調(diào)。血管內(nèi)皮頂細胞的功能選擇因此受限,導(dǎo)致血管生長延伸緩慢和分支下潛困難；（2）MEKK3缺失時,β1-Integrin-PKC/Par3/Par6信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到干擾,造... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
綜述
    參考文獻
1 MEKK3調(diào)節(jié)血管出芽(vascular sprouting)
    1.1 實驗方法
        1.1.1 實驗抗體
        1.1.2 實驗動物
        1.1.3 視網(wǎng)膜免疫組化染色
        1.1.4 細胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        1.1.5 定量RT-PCR
        1.1.6 免疫印跡Western Blot
        1.1.7 統(tǒng)計分析
    1.2 實驗結(jié)果與分析
        1.2.1 MEKK3基因敲除能引發(fā)血管生成缺陷
        1.2.2 MEKK3缺失所引起的血管生長受限主要是因為其對于頂細胞功能的影響
        1.2.3 MEKK3對頂細胞功能的調(diào)節(jié)是通過BMP9信號通路和Notch信號通路所介導(dǎo)的
        1.2.4 內(nèi)皮細胞中MEKK3介導(dǎo)R-Smad的序列中間連接域的磷酸化并阻礙Smad的轉(zhuǎn)錄活性
    1.3 結(jié)論
2 MEKK3調(diào)節(jié)血管分支的形成(vascular branching)
    2.1 實驗方法
        2.1.1 實驗抗體
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 視網(wǎng)膜免疫組化染色
        2.1.4 小鼠眼球后注射熒光標記的Dextran
        2.1.5 Sulfo-NHS-biotin腦血管顯色
        2.1.6 統(tǒng)計分析
    2.2 實驗結(jié)果與分析
        2.2.1 MEKK3基因敲除會誘發(fā)腦出血
        2.2.2 MEKK3缺失導(dǎo)致腦血管形態(tài)異常
        2.2.3 MEKK3缺失會導(dǎo)致血管的血液運輸功能受損
        2.2.4 MEKK3對腦血管功能的影響是因為內(nèi)皮細胞MEKK3的缺失
        2.2.5 內(nèi)皮細胞MEKK3缺失所造成的腦血管形態(tài)和功能喪失是因為管腔形成的缺陷
        2.2.6 從內(nèi)皮細胞中分離內(nèi)源性的MEKK3復(fù)合物
    2.3 結(jié)論
參考文獻
攻讀學位期間主要的研究成果目錄
致謝



本文編號：3265448