本文關(guān)鍵詞：一株抗腫瘤新城疫病毒的全基因組測序及毒力測定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)為單負鏈不分節(jié)段的RNA病毒,屬于副黏病毒屬。近些年來,NDV的宿主范圍不斷擴大,可感染多種家禽和野生鳥類,引發(fā)新城疫(newcastle disease, ND),而人類對NDV的感染率極低,主要表現(xiàn)為流感樣癥狀。NDV對腫瘤細胞的特異性殺傷能力已經(jīng)使其成為抗腫瘤生物制劑的研究熱點。目前,越來越多的NDV株已被證明能夠高效抗腫瘤,而對于同一種腫瘤細胞,不同NDV株的殺傷能力卻不同,這可能與病毒間的基因組序列差異密切相關(guān)。同時,NDV的抗腫瘤機制研究越來越需要將病毒基因組序列與NDV誘導的腫瘤細胞凋亡信號通路聯(lián)系起來。本實驗室保存一株抗腫瘤NDV——HBNU/LSRC/F3,其抗腫瘤機制已被初步探索,本實驗將測定HBNU/LSRC/F3的毒力及其全基因組序列。 在毒力測定部分,首先制備NDV HBNU/LSRC/F3和Mukteswar,之后設(shè)立空白對照組、陰性對照組(滅菌生理鹽水)、陽性對照組(Mukteswar)及實驗組,最后測定雞胚平均致死時間(mean death time of chick-embryos, MDT)、腦內(nèi)致病指數(shù)(intracerebral pathogenicity index, ICPI)及靜脈致病指數(shù)(intravenous pathogenicity index, IVPI)。在全基因組測序部分,首先通過試劑盒提取病毒基因組RNA,之后利用設(shè)計的16對引物通過一步法RT-PCR及兩步法RT-PCR進行目的片段的擴增,擴增片段之間部分重疊,且拼接后覆蓋整個基因組。對于基因組的兩末端,采用錨定引物及特異性引物,通過簡化的cDNA末端快速擴增技術(shù)(rapid amplification of cDNA end, RACE)而獲取相應(yīng)的擴增片段。所有擴增片段在電泳鑒定后被送往北京華大公司進行純化后測序,并通過生物信息學軟件處理測序結(jié)果和進行序列分析。 結(jié)果顯示HBNU/LSRC/F3的MDT為105.6h,ICPI為0.26, IVPI為0,這些致病指數(shù)均在弱毒株范圍內(nèi),故HBNU/LSRC/F3為弱毒株。但經(jīng)序列對比及分析后發(fā)現(xiàn),HBNU/LSRC/F3F蛋白的裂解位點具有強毒株的特征性結(jié)構(gòu),即112RRQRR↓F117,因此HBNU/LSRC/F3為F蛋白具有強毒株裂解位點的NDV弱毒株,可被歸為不遵循一般規(guī)則的特殊NDV,其毒力必然與除F蛋白裂解位點之外的其他因素密切相關(guān)。 HBNU/LSRC/F3基因組全長為15192nt,其中蛋白編碼序列含量為90.5%,G+C mol%為46.8%。整個基因組包括3’末端(55nt)、NP基因(1753nt)、P基因(1451nt)、M基因(1241nt)、F基因(1792nt)、HN基因(2002nt)、L基因(6703nt)和5’末端(114nt)。6個基因的編碼蛋白為NP蛋白(489aa)、P蛋白(395aa)、V蛋白(239aa)、W蛋白(137aa)、M蛋白(364aa)、F蛋白(553aa)、HN蛋白(571aa)及L蛋白(2204aa)。繪制的各個系統(tǒng)進化樹表明HBNU/LSRC/F3屬于Class II譜系的基因Ⅸ型,基因Ⅸ型與基因Ⅲ型的親緣關(guān)系最近。HBNU/LSRC/F3與典型NDV株比較,與F48E8的序列相似性最高。 本實驗通過傳統(tǒng)毒力測定方法、分子生物學技術(shù)及生物信息學軟件對HBNU/LSRC/F3的毒力及全基因組序列進行了測定和初步分析,旨在為后續(xù)充分了解HBNU/LSRC/F3的抗瘤機制及提高其溶瘤特性提供相關(guān)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：新城疫病毒 毒力 基因組 系統(tǒng)進化樹 序列相似性
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-31
• 1 材料14-17
• 2 方法17-31
• 結(jié)果31-38
• 附圖38-53
• 附表53-60
• 討論60-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻67-73
• 綜述 新城疫病毒用于聯(lián)合抗腫瘤的研究進展73-87
• 參考文獻81-87
• 致謝87-88
• 個人簡歷88

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：一株抗腫瘤新城疫病毒的全基因組測序及毒力測定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：323662