本文關(guān)鍵詞：一株抗腫瘤新城疫病毒的全基因組測(cè)序及毒力測(cè)定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)為單負(fù)鏈不分節(jié)段的RNA病毒,屬于副黏病毒屬。近些年來(lái),NDV的宿主范圍不斷擴(kuò)大,可感染多種家禽和野生鳥(niǎo)類,引發(fā)新城疫(newcastle disease, ND),而人類對(duì)NDV的感染率極低,主要表現(xiàn)為流感樣癥狀。NDV對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷能力已經(jīng)使其成為抗腫瘤生物制劑的研究熱點(diǎn)。目前,越來(lái)越多的NDV株已被證明能夠高效抗腫瘤,而對(duì)于同一種腫瘤細(xì)胞,不同NDV株的殺傷能力卻不同,這可能與病毒間的基因組序列差異密切相關(guān)。同時(shí),NDV的抗腫瘤機(jī)制研究越來(lái)越需要將病毒基因組序列與NDV誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡信號(hào)通路聯(lián)系起來(lái)。本實(shí)驗(yàn)室保存一株抗腫瘤NDV——HBNU/LSRC/F3,其抗腫瘤機(jī)制已被初步探索,本實(shí)驗(yàn)將測(cè)定HBNU/LSRC/F3的毒力及其全基因組序列。 在毒力測(cè)定部分,首先制備NDV HBNU/LSRC/F3和Mukteswar,之后設(shè)立空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組(滅菌生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照組(Mukteswar)及實(shí)驗(yàn)組,最后測(cè)定雞胚平均致死時(shí)間(mean death time of chick-embryos, MDT)、腦內(nèi)致病指數(shù)(intracerebral pathogenicity index, ICPI)及靜脈致病指數(shù)(intravenous pathogenicity index, IVPI)。在全基因組測(cè)序部分,首先通過(guò)試劑盒提取病毒基因組RNA,之后利用設(shè)計(jì)的16對(duì)引物通過(guò)一步法RT-PCR及兩步法RT-PCR進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增,擴(kuò)增片段之間部分重疊,且拼接后覆蓋整個(gè)基因組。對(duì)于基因組的兩末端,采用錨定引物及特異性引物,通過(guò)簡(jiǎn)化的cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(rapid amplification of cDNA end, RACE)而獲取相應(yīng)的擴(kuò)增片段。所有擴(kuò)增片段在電泳鑒定后被送往北京華大公司進(jìn)行純化后測(cè)序,并通過(guò)生物信息學(xué)軟件處理測(cè)序結(jié)果和進(jìn)行序列分析。 結(jié)果顯示HBNU/LSRC/F3的MDT為105.6h,ICPI為0.26, IVPI為0,這些致病指數(shù)均在弱毒株范圍內(nèi),故HBNU/LSRC/F3為弱毒株。但經(jīng)序列對(duì)比及分析后發(fā)現(xiàn),HBNU/LSRC/F3F蛋白的裂解位點(diǎn)具有強(qiáng)毒株的特征性結(jié)構(gòu),即112RRQRR↓F117,因此HBNU/LSRC/F3為F蛋白具有強(qiáng)毒株裂解位點(diǎn)的NDV弱毒株,可被歸為不遵循一般規(guī)則的特殊NDV,其毒力必然與除F蛋白裂解位點(diǎn)之外的其他因素密切相關(guān)。 HBNU/LSRC/F3基因組全長(zhǎng)為15192nt,其中蛋白編碼序列含量為90.5%,G+C mol%為46.8%。整個(gè)基因組包括3’末端(55nt)、NP基因(1753nt)、P基因(1451nt)、M基因(1241nt)、F基因(1792nt)、HN基因(2002nt)、L基因(6703nt)和5’末端(114nt)。6個(gè)基因的編碼蛋白為NP蛋白(489aa)、P蛋白(395aa)、V蛋白(239aa)、W蛋白(137aa)、M蛋白(364aa)、F蛋白(553aa)、HN蛋白(571aa)及L蛋白(2204aa)。繪制的各個(gè)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)表明HBNU/LSRC/F3屬于Class II譜系的基因Ⅸ型,基因Ⅸ型與基因Ⅲ型的親緣關(guān)系最近。HBNU/LSRC/F3與典型NDV株比較,與F48E8的序列相似性最高。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)傳統(tǒng)毒力測(cè)定方法、分子生物學(xué)技術(shù)及生物信息學(xué)軟件對(duì)HBNU/LSRC/F3的毒力及全基因組序列進(jìn)行了測(cè)定和初步分析,旨在為后續(xù)充分了解HBNU/LSRC/F3的抗瘤機(jī)制及提高其溶瘤特性提供相關(guān)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：新城疫病毒 毒力 基因組 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù) 序列相似性
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫(xiě)9-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-31
• 1 材料14-17
• 2 方法17-31
• 結(jié)果31-38
• 附圖38-53
• 附表53-60
• 討論60-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 綜述 新城疫病毒用于聯(lián)合抗腫瘤的研究進(jìn)展73-87
• 參考文獻(xiàn)81-87
• 致謝87-88
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷88

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 王凱冰;隋紅;李樂(lè)靜;李曦;王磊;;定位表達(dá)的新城疫病毒HN蛋白對(duì)荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫作用[J];中國(guó)肺癌雜志;2010年08期

2 梁偉,孟凡娟,孫鐵民,梁仲奎,金雨;西洋參莖葉皂苷與新城疫病毒治療惡性腫瘤臨床應(yīng)用[J];遼寧中醫(yī)雜志;2005年08期

3 侯萍;劉培淑;季曉峰;劉波;;新城疫病毒疫苗和IL-15治療3AO裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2009年09期

4 王靜;董尚林;盧志紅;劉進(jìn)軍;孫黎;劉開(kāi)揚(yáng);;新城疫病毒誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞ECA-109凋亡的體外研究[J];山東醫(yī)藥;2011年21期

5 郝景波;王文飛;吳云舟;劉銘瑤;高振秋;張巧;顏世君;李德山;;重組新城疫病毒Anhinga株與TRAIL蛋白協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2011年01期

6 孟松樹(shù);白海;胡茂志;劉文博;王莉;吳艷濤;焦新安;范健;;新城疫病毒FMW株體外溶瘤作用及其機(jī)制分析[J];微生物學(xué)報(bào);2009年04期

7 劉開(kāi)揚(yáng),劉春霞,戴潔,翟登高,侯海波,程建貞;加熱和病毒感染對(duì)胃癌細(xì)胞HSP70表達(dá)及細(xì)胞周期的影響[J];中國(guó)腫瘤臨床;2003年07期

8 詹媛;陳鴻軍;仇旭升;孫英杰;于圣青;丁鏟;;宿主細(xì)胞磷酸激酶在新城疫病毒感染中的作用[J];中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2011年02期

9 張琪;楊鳴琦;王根輩;趙忠華;范光麗;;新城疫病毒和康萊特注射液聯(lián)合抗腫瘤試驗(yàn)中瘤組織的病理變化及IL-6表達(dá)的研究[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2010年10期

  本文關(guān)鍵詞：一株抗腫瘤新城疫病毒的全基因組測(cè)序及毒力測(cè)定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：323662