本文關(guān)鍵詞：江蘇省不同地區(qū)淡色庫蚊的遺傳多樣性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]應(yīng)用擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)技術(shù)對江蘇省不同地區(qū)淡色庫蚊的遺傳多樣性及遺傳變異進(jìn)行分析,計(jì)算樣品間的遺傳相似性指數(shù)和遺傳距離,并構(gòu)建UPGMA(非加權(quán)分組平均法)系統(tǒng)發(fā)生樹。 [方法]從江蘇省收集了8個(gè)地區(qū)的淡色庫蚊,分別來自常熟、張家港、鹽城、無錫、徐州、南京、南通、昆山,還收集了南京醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的典型淡色庫蚊；用QIAGEN DNeasy Kit試劑盒分別提取蚊基因組DNA,通過COI基因擴(kuò)增、多重PCR擴(kuò)增ITS基因和ITS的克隆測序進(jìn)行模板的驗(yàn)證,然后進(jìn)行AFLP的分析,即通過酶切與連接、預(yù)擴(kuò)增、選擇性擴(kuò)增,再經(jīng)毛細(xì)管電泳篩選出分辨率高的電泳圖；將電泳圖上出現(xiàn)的條帶標(biāo)記為1,沒有條帶的標(biāo)記為0,建立0,1矩陣,將結(jié)果輸入NTSYS2.10軟件上計(jì)算Nei-Li相似性系數(shù),遺傳距離(GD)用公式計(jì)算：GD=1-2Nab/(Na+Nb),采用UPGMA(unweighted pair-group method with arithmetic means,非加權(quán)分組平均法)進(jìn)行聚類分析。 [結(jié)果]從80對引物組合中篩選出10對引物組合,這10對引物組合在9個(gè)樣本中共擴(kuò)增到262個(gè)位點(diǎn),大小位于100-1500bp,多態(tài)性位點(diǎn)185個(gè),多態(tài)性比率(PP)達(dá)70.6%,每對引物擴(kuò)增到的多態(tài)性位點(diǎn)在14-30個(gè)之間,平均18.5個(gè)。引物組合E2M7擴(kuò)增的多態(tài)性最高,多態(tài)性比例為87.5%,引物組合E4M7擴(kuò)增的多態(tài)性最低,多態(tài)性比例為48.3%,10對引物中昆山地區(qū)擴(kuò)增的位點(diǎn)最多(176個(gè)),南通地區(qū)擴(kuò)增的位點(diǎn)最少(48個(gè))；利用NTSYS2.10軟件計(jì)算表明,昆山與張家港間的遺傳相似性指數(shù)最大(0.8478),遺傳距離最小(0.1522),無錫和徐州間的遺傳相似性指數(shù)最小(0.2139),遺傳距離最大(0.7861)�；贜ei遺傳距離構(gòu)建的UPGMA系統(tǒng)發(fā)生樹表明,以相似性系數(shù)0.64為域值,9個(gè)地區(qū)的淡色庫蚊聚成三支,其中南醫(yī)大、鹽城、徐州聚成一支；常熟、張家港、昆山聚成一支；無錫、南通、南京聚成一支。 [結(jié)論]江蘇省不同地區(qū)的淡色庫蚊存在顯著的遺傳多樣性和遺傳差異,且表明AFLP技術(shù)具有極好的分辨率,可以有效地進(jìn)行淡色庫蚊遺傳多樣性的分析。
【關(guān)鍵詞】：淡色庫蚊 AFLP 遺傳多態(tài)性 分子鑒定 遺傳相似性 聚類分析
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R384.1
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 注釋說明清單12-13
• 引言13-18
• 1 材料與方法18-33
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)蚊18
• 1.1.2 主要試劑18
• 1.1.3 主要溶液及緩沖液的配制18-19
• 1.1.4 主要儀器19-20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法20-32
• 1.2.1 淡色庫蚊的分子鑒定20-25
• 1.2.2 淡色庫蚊的遺傳多樣性分析25-32
• 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析32-33
• 2 結(jié)果與分析33-42
• 2.1 mtDNA-COI基因的擴(kuò)增與測序結(jié)果33-35
• 2.1.1 淡色庫蚊基因組DNA的提取33-34
• 2.1.2 mtDNA-COI基因PCR產(chǎn)物34
• 2.1.3 mtDNA-COI基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測序結(jié)果34-35
• 2.2 rDNA-ITS基因多重PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳35
• 2.3 rDNA-ITS克隆測序結(jié)果35-36
• 2.4 PCR預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳36-37
• 2.5 PCR選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳37-38
• 2.6 PCR選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物的毛細(xì)管電泳38-39
• 2.7 樣本AFLP擴(kuò)增結(jié)果及遺傳多樣性39-42
• 2.7.1 AFLP擴(kuò)增結(jié)果39-40
• 2.7.2 各個(gè)地區(qū)淡色庫蚊的遺傳多樣性40
• 2.7.3 各個(gè)地區(qū)淡色庫蚊的UPGMA分析40-42
• 3 討論42-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 后記或致謝54-55
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳永久,王學(xué)忠,王丕玉,張亞平;云南微小按蚊隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA及遺傳分化關(guān)系[J];動(dòng)物學(xué)研究;1998年03期

2 胡紅霞;孫立新;葉松;陸軍;朱國強(qiáng);楊慶貴;;蚊AFLP技術(shù)體系的建立[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年01期

3 瞿逢伊;蚊蟲分子分類研究進(jìn)展[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào);1996年01期

4 張全啟,徐曉斐,齊潔,王興蓮,包振民;牙鲆野生群體與養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性分析[J];中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2004年05期

5 馬洪雨;陳松林;田永勝;季相山;;我國引進(jìn)條斑星鰈群體遺傳多樣性的AFLP分析[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2008年03期

6 羅成;劉錦;顧蔚;張琛;王U喼

本文編號：323542