發(fā)布時(shí)間：2017-04-24 03:02

  本文關(guān)鍵詞：TERT在小鼠卵母細(xì)胞和原核期胚胎玻璃化冷凍前后表達(dá)變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 世界首例冷凍胚胎成功妊娠分娩報(bào)道于二十世紀(jì)八十年代,目前冷凍-復(fù)蘇胚胎已經(jīng)成為常見(jiàn)的輔助生殖衍生技術(shù),配子以及原核期、卵裂期和囊胚期胚胎的有效冷凍保存方法也在不斷的探索中。 玻璃化冷凍(vitrification)技術(shù)的基本原理是將高濃度的冷凍保護(hù)劑在超低溫環(huán)境下凝固,形成不規(guī)則的玻璃化樣固體,保存了液態(tài)時(shí)正常分子和離子分布,因而在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生玻璃化時(shí)能起到保護(hù)作用,避免冰晶的產(chǎn)生對(duì)胚胎造成傷害。雖然玻璃化冷凍相比較慢速冷凍顯著改善了人類(lèi)配子和不同時(shí)期胚胎低溫貯藏的復(fù)蘇率、存活率和妊娠率,成為臨床更可靠的冷凍方法,甚至被運(yùn)用在高難度的卵子、卵巢組織和人類(lèi)胚胎干細(xì)胞的冷凍上,但仍不可避免的會(huì)發(fā)生冷凍損傷。冷凍損傷主要包括紡錘體和染色體異常,透明帶變硬,細(xì)胞膜損害,超微結(jié)構(gòu)損傷如線粒體異常等,以及其他可導(dǎo)致細(xì)胞死亡的改變,如DNA損傷,mRNA水平的改變和蛋白功能異常等,這些結(jié)構(gòu)和功能的損傷常造成嚴(yán)重后果,但可能不會(huì)在解凍復(fù)蘇時(shí)立即表現(xiàn)出來(lái)。端粒酶(telomerase)是由端粒RNA和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)兩個(gè)亞基組成的核酸蛋白復(fù)合物。其中,TERT是端粒酶活性的必需和限速成分,其水平?jīng)Q定細(xì)胞端粒酶的活性。TERT能以自身RNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成端粒DNA序列,并引導(dǎo)端粒添加到染色體的尾端,對(duì)維持染色體的長(zhǎng)度、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡起重要作用。成熟體細(xì)胞的端粒酶活性缺乏或者極低,而在腫瘤細(xì)胞和生殖細(xì)胞中端粒酶活性較高,這種較高的活性可以保證細(xì)胞處于高度的活性狀態(tài)。研究證明TERT對(duì)端粒長(zhǎng)度的調(diào)節(jié)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上,人TERT沉默受表觀遺傳控制。端粒和端粒酶在動(dòng)物生殖細(xì)胞受精和早期卵裂中發(fā)揮的重要作用。端粒酶缺陷模型小鼠的后代表現(xiàn)為進(jìn)行性的組織器官增殖缺陷和生育力低下。 目的 分別測(cè)定成熟卵母細(xì)胞和原核期胚胎TERT mRNA表達(dá)量,對(duì)比玻璃化冷凍前后TERT mRNA表達(dá)水平的變化,初步探討不同階段卵子冷凍耐受性差異的原因,為人類(lèi)卵子冷凍損傷機(jī)制和卵子庫(kù)建立提供研究基礎(chǔ)。 材料和方法 采用河南省動(dòng)物中心8-12周昆明系小鼠,尿促性素(HMG)10IU/只后48小時(shí)注射人絨促性素(HCG)10IU/只,部分成熟卵子行體外受精(IVF)以獲取原核期胚胎。實(shí)驗(yàn)組分為新鮮MII組,凍融MII組,新鮮合子組和凍融合子組。采用玻璃化冷凍保存MII卵子和原核期胚胎7-10天,分別PCR測(cè)定新鮮組和冷凍復(fù)蘇組各種生殖細(xì)胞內(nèi)TERT的mRNA表達(dá)水平,進(jìn)行3次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn),采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,并行TERT抗體熒光染色。 結(jié)果 1.小鼠新鮮MII卵和原核期胚胎熒光免疫染色均見(jiàn)TERT蛋白胞漿陽(yáng)性表達(dá)。獲得新鮮MII卵157枚,原核期胚胎133枚,原核期胚胎TERT含量略低于MII期卵母細(xì)胞,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 2.獲得凍融MII卵118枚(復(fù)蘇存活率71.5%),其TERT含量略低于新鮮MII期卵母細(xì)胞,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 3.獲得凍融原核期胚胎121枚(復(fù)蘇存活率87.7%),其TERT含量略低于新鮮原核期胚胎,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 結(jié)論 1.小鼠成熟卵母細(xì)胞和原核期胚胎均表達(dá)端粒酶活性。 2.原核期胚胎端粒酶活性稍低于成熟卵母細(xì)胞,但無(wú)顯著性差異。 3.玻璃化冷凍后,小鼠成熟卵母細(xì)胞和原核期胚胎端粒酶活性均有降低趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異。 4.玻璃化冷凍復(fù)蘇可能不影響小鼠成熟卵母細(xì)胞和原核期胚胎端粒酶活性的mRNA水平表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：端粒酶 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT) 玻璃化冷凍 成熟卵母細(xì)胞 原核期胚胎
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R321.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文~.略詞（Abbreviations)11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-24
• 討論24-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述38-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷49
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 金海霞,孫瑩璞,辛志敏,蘇迎春,郭藝紅;不同冷凍法對(duì)小鼠未成熟與成熟卵母細(xì)胞的成熟及胚胎發(fā)育的影響[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2005年07期

  本文關(guān)鍵詞：TERT在小鼠卵母細(xì)胞和原核期胚胎玻璃化冷凍前后表達(dá)變化的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：323443