目的探討細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的種類及清除方法。方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室不同培養(yǎng)者培養(yǎng)的各細(xì)胞系污染支原體情況。首先設(shè)計(jì)支原體種屬特異性的簡(jiǎn)并引物，針對(duì)其16s-23s基因間隔區(qū)序列，用來檢測(cè)支原體陽(yáng)性片段條帶。根據(jù)簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增的片段測(cè)序明確為何種支原體污染。然后針對(duì)污染支原體的種類和滴度，采用方差分析方法，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，探索一種合理的配方藥物用于細(xì)胞培養(yǎng)，能夠短期殺滅細(xì)胞培養(yǎng)中污染的支原體。對(duì)于藥物對(duì)支原體的殺滅作用采用定量PCR的方法檢測(cè)，對(duì)于藥物對(duì)細(xì)胞的副作用，采用流式細(xì)胞數(shù)測(cè)細(xì)胞周期的方法作為指標(biāo)來評(píng)估。對(duì)于細(xì)胞內(nèi)支原體的污染，采用免疫熒光后激光共聚焦顯微鏡觀察的方法來明確細(xì)胞內(nèi)變化。結(jié)果1)設(shè)計(jì)的支原體屬及萊氏無膽甾原體屬簡(jiǎn)并引物及特異性引物可以快速的檢測(cè)出有無支原體污染，根據(jù)條帶對(duì)比可以初步明確為何種支原體污染，進(jìn)一步明確還可以通過測(cè)序的金標(biāo)準(zhǔn)來明確。通過該方法可以快速的檢測(cè)且準(zhǔn)確性可靠。2)經(jīng)方差分析各種藥物濃度組合，篩選出具有抗支原體作用顯著的幾種組合。藥物選自三種類型，分別為：截短側(cè)耳素類，第三代喹諾酮類及以上，四環(huán)素類。分別配成A,B,C液。所述試劑由A液、B液等體積混合或A液... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
引言
    參考文獻(xiàn)
第一部分：細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的鑒定和清除
    摘要
    Abstract
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分：支原體小GTP結(jié)合蛋白類似片段（SGLP）與宿主細(xì)胞Rac1和Stat3相互作用及其功能影響
    摘要
    Abstract
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附:試劑配方
發(fā)表論文和專利
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]活性氧與骨髓造血干細(xì)胞衰老研究進(jìn)展[J]. 柴笑,趙明峰.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2012(06)
[2]Mycoplasma infections and different human carcinomas[J]. Su Huang; Ji You Li; Jan Wu; Lin Meng; Cheng Chao Shou Beijing Institute for Cancer Research, Peking University School of Oncology, Beijing 100034. ChinaSu Huang, received B. A from Jiangxi Medical College of China in 1994. Now she is a graduate student pursuing a Ph. D degree at the Peking University School of Oncology..  World Journal of Gastroenterology. 2001(02)



本文編號(hào)：3206538