目的采用基因芯片的方法篩選燒傷患者變性真皮較正常皮膚中差異表達(dá)的miRNAs,然后預(yù)測(cè)其靶基因以及對(duì)變性真皮可能起保護(hù)作用的信號(hào)通路；挑選出在細(xì)胞增殖和遷移中發(fā)揮重要作用的miR-199a-5p及miR-126,檢測(cè)其在大鼠變性真皮中的表達(dá)規(guī)律；深入研究miR-199a-5p在熱損傷成纖維細(xì)胞、miR-126在熱損傷人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）轉(zhuǎn)歸中的作用,并探討其可能的機(jī)制。方法1.收集深二度燒傷患者的變性真皮及配對(duì)正常皮膚,標(biāo)本收集時(shí)間均為患者燒傷后第四天,采用高通量miRNA芯片技術(shù)初步篩選出變性真皮較正常皮膚差異表達(dá)的miRNAs。在另一組標(biāo)本中應(yīng)用QRT-PCR技術(shù)檢測(cè)部分差異表達(dá)的miRNAs,驗(yàn)證芯片結(jié)果的準(zhǔn)確性。使用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)其靶基因以及對(duì)變性真皮可能起保護(hù)作用的信號(hào)通路。篩選出與芯片結(jié)果一致并且在細(xì)胞增殖和遷移中發(fā)揮重要作用的miRNAs （miR-199a-5p和miR-126）進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。2.建立大鼠深二度燙傷模型,檢測(cè)miR-199a-5p和miR-126在大鼠變性真皮恢復(fù)不同時(shí)間（燙傷后1天、3天、5天、7天、14天）的表達(dá)情況,以大鼠正常... 

【文章來(lái)源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：119 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
英文縮寫詞表
引言
第一章 深度燒傷患者變性真皮中miRNAs的表達(dá)變化及功能預(yù)測(cè)
    摘要
    Abstract
    前言
    材料與方法
        1. 主要試劑及器材
            1.1 miRNA芯片
            1.2 其它主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑的配制
        2. 方法
            2.1 燒傷患者變性真皮組織的收取
            2.2 組織切片及HE染色
            2.3 miRNA芯片技術(shù)檢測(cè)燒傷患者變性真皮中miRNAs的表達(dá)
            2.4 miRNA的逆轉(zhuǎn)錄
            2.5 miRNA的QRT-PCR
            2.6 miRNA引物序列
            2.7 靶基因預(yù)測(cè)及信號(hào)通路分析
            2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        1. 研究對(duì)象的相關(guān)資料
        2. 變性真皮的組織病理學(xué)檢查
        3. 芯片檢測(cè)燒傷患者變性真皮miRNA表達(dá)的變化
        4. 對(duì)燒傷患者變性真皮與正常皮膚差異表達(dá)miRNAs的驗(yàn)證
        5 靶基因預(yù)測(cè)及信號(hào)通路分析
    討論
第二章 miR-199a-5p在熱損傷成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)歸中的表達(dá)及作用
    摘要
    Abstract
    前言
    材料與方法
        1. 主要試劑及器材
            1.1 試劑及材料
            1.2 主要儀器
            1.3 主要試劑配制
        2. 大鼠深二度燙傷
            2.1 深二度燙傷模型的制作
            2.2 動(dòng)物分組
            2.3 標(biāo)本采集及處理
        3 原代成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)
            3.1 原代皮膚成纖維細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)
            3.2 細(xì)胞傳代
            3.3 細(xì)胞的凍存
            3.4 細(xì)胞的復(fù)蘇
            3.5 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4. 成纖維細(xì)胞熱損傷模型的制作
        5. 組織及細(xì)胞miRNA的提取(使用Rneasy mini kit)
        6. MTT法
        7. 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        8. Transwell遷移實(shí)驗(yàn)
        9. miRNA轉(zhuǎn)染
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. miR-199a-5p在大鼠變性真皮中的表達(dá)
            1.1 大鼠深二度燙傷模型
            1.2 miR-199a在大鼠變性真皮中的表達(dá)
        2. 成纖維細(xì)胞的熱損傷預(yù)處理
            2.1 成纖維細(xì)胞的熱損傷模型
            2.2 成纖維細(xì)胞熱損傷后miRNA-199a-5p的表達(dá)
        3. miRNA-199a-5p mimics和miRNA-199a-5p inhibitors轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞
        4. miRNA-199a-5p對(duì)熱損傷成纖維細(xì)胞增殖能力的影響
        5. miRNA-199a-5p對(duì)熱損傷成纖維細(xì)胞遷移能力的影響
            5.1 劃痕試驗(yàn)
            5.2 transwell
        6. miRNA-199a-5p的靶基因預(yù)測(cè)及篩選
    討論
第三章 miR-126在熱損傷HUVECs轉(zhuǎn)歸中的作用
    摘要
    Abstract
    前言
    材料與方法
        1. 主要試劑及器材
            1.1 試劑及材料
            1.2 主要儀器
            1.3 miRNA mimics 及 miRNA inhibitors 的配制
        2. 大鼠深二度燙傷
            2.1 深二度燙傷模型的制作
            2.2 動(dòng)物分組
            2.3 標(biāo)本采集及處理
        3. 原代HUVECs的培養(yǎng)
            3.1 原代HUVECs的培養(yǎng)
            3.2 細(xì)胞傳代、細(xì)胞凍存、細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4. HUVECs熱損傷模型的制作
        5. 組織及細(xì)胞miRNA的提取(使用Rneasy mini kit)
        6. miRNA轉(zhuǎn)染
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. miR-126在大鼠變性真皮中的表達(dá)
        2. HUVECs的熱損傷預(yù)處理
            2.1 HUVECs的熱損傷模型
            2.2 HUVECs熱損傷后miRNA-126的表達(dá)
        3 miRNA-126 mimics和miRNA-126 inhibitors轉(zhuǎn)染HUVECs
        4. miRNA-126對(duì)熱損傷HUVECs增殖能力的影響
        5. miRNA-126對(duì)熱損傷HUVECs遷移能力的影響
            5.1 劃痕試驗(yàn)
            5.2 transwell
        6. miRNA-126的靶基因預(yù)測(cè)及篩選
    討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
博士期間的研究成果
    一：參與科研情況
    二：論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人臍帶與骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞miRNA的差異表達(dá)[J]. 張芳,陳學(xué)斌,盛望.  北京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(10)
[2]miR-199a-3p對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響[J]. 孔繁飛,王中顯,孫朝陽(yáng),呂煊,翁丹卉,盧運(yùn)萍,陳剛,吳明富.  腫瘤防治研究. 2011(08)
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[7]CCN蛋白家族研究進(jìn)展[J]. 焦園園,楊桂文,安利國(guó),葉棋濃.  山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(03)
[8]大鼠深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面保留變性真皮并覆蓋自體皮療效觀察[J]. 劉英,黃曉元,楊興華.  中華燒傷雜志. 2005(01)
[9]保留變性真皮并移植大張自體皮修復(fù)手部深度燒傷的遠(yuǎn)期療效觀察[J]. 楊興華,黃曉元,雷少榕,張丕紅,張明華,肖目張,曾紀(jì)章,龍劍虹.  中華燒傷雜志. 2005(01)
[10]變性真皮與自體皮復(fù)合移植修復(fù)手部深度燒傷[J]. 黃曉元,楊興華,雷少榕,肖目張,張明華,曾紀(jì)章.  中華燒傷雜志. 2001(01)



本文編號(hào)：3202699