O-GlcNAc糖基化修飾是一種動態(tài)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,廣泛存在于植物和動物中,能夠影響蛋白的催化活性、亞細胞定位以及與其他蛋白之間的相互作用,參與細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、能量代謝等重要的細胞生理活動,與多種慢性疾病相關(guān)。O-GlcNAc糖基轉(zhuǎn)移酶（OGT）負責催化O-GlcNAc糖基轉(zhuǎn)移反應(yīng)的發(fā)生。在人體內(nèi),OGT有三種亞型,即ncOGT、mOGT和sOGT,其結(jié)構(gòu)的主要差異在于N末端TPR序列數(shù)目不同。由于三種亞型C末端催化結(jié)構(gòu)域是完全相同的,因此其催化機制以及其與糖基供體的識別機制也應(yīng)是相同的。因此在本課題中,我們選取了較為容易表達的sOGT作為研究對象,首先對其底物特異性進行了研究。以CKII十七肽為受體底物,我們探索sOGT對26種UDP-GlcNAc衍生物的催化活性。其中,UDP-6-deoxy-GlcNA、UDP-GlcNPr、UDP-6-deoxy-GalNAc和UDP-4-deoxy-GlcNAc四種化合物能夠作為sOGT的供體底物。進一步對其中三種化合物的酶學常數(shù)的測定表明,UDP-GlcNAc糖基基團的C2位乙酰氨基上的取代、C6和C4位羥基的脫氧取代以及C4位羥基的異... 

【文章來源】：南開大學天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：156 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    第一節(jié) 糖的生物學意義
        1.1.1 生物體內(nèi)的糖和糖類復(fù)合物
        1.1.2 糖基化修飾相關(guān)酶類
        1.1.3 UDP-GlcNAc與HBP途徑
    第二節(jié) O-GlcNAc糖基化
        1.2.1 O-GlcNAc糖基化的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 O-GlcNAc糖基化的特點
        1.2.3 O-GlcNAc糖基化對蛋白功能的影響
        1.2.4 O-GlcNAc糖基化對細胞生理活動的影響
        1.2.5 O-GlcNAc糖基化與疾病
    第三節(jié) N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶(OGT)
        1.3.1 OGT的生物學意義
        1.3.2 OGT的亞型與分布
        1.3.3 OGT的結(jié)構(gòu)與反應(yīng)機制
        1.3.4 OGT的自身糖基化
第二章 材料與方法
    第一節(jié) 實驗材料
        2.1.1 實驗用菌株、基因及細胞來源
        2.1.2 糖供體和糖受體來源
        2.1.3 主要實驗試劑及耗材
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 主要試劑的配制
    第二節(jié) 實驗方法
        2.2.1 sOGT外源表達及功能驗證
        2.2.2 sOGT供體底物的篩選及酶活常數(shù)測定
        2.2.3 OGT自身糖基化現(xiàn)象在細胞水平和組織水平的驗證
        2.2.4 sOGT細胞內(nèi)功能驗證
        2.2.5 sOGT自身糖基化及其功能的驗證
第三章 OGT供體底物識別機制
    第一節(jié) 結(jié)果及分析
        3.1.1 pET28a-sOGT重組質(zhì)粒的驗證
        3.1.2 sOGT供體底物的篩選及酶活常數(shù)測定
    第二節(jié) 討論
    第三節(jié) 小結(jié)
第四章 OGT自身O-GlcNAc糖基化修飾的功能
    第一節(jié) 結(jié)果與分析
        4.1.1 OGT自身糖基化現(xiàn)象在細胞水平和組織水平的驗證
        4.1.2 sOGT細胞內(nèi)功能驗證
        4.1.3 sOGT自身糖基化位點的驗證
        4.1.4 sOGT自身糖基化的功能
    第二節(jié) 討論
        4.2.1 OGT自身糖基化現(xiàn)象的驗證
        4.2.2 sOGT自身糖基化位點的鑒定
        4.2.3 OGT自身糖基化的功能
    第三節(jié) 小結(jié)
參考文獻
致謝
附錄
    附錄A 非糖基化sOGT結(jié)合的互作蛋白
    附錄B 糖基化sOGT結(jié)合的互作蛋白
個人簡歷及在學期間發(fā)表的學術(shù)論文與研究成果
    個人簡歷
    研究成果



本文編號：3171215