研究背景與目的：骨關(guān)節(jié)炎（OA）是一種骨科常見的退行性變疾病,病因目前尚不清楚。OA目前較為公認(rèn)的危險因素之一是長期超負(fù)荷的外力作用,肥胖人群的OA發(fā)病率顯著上升。瘦素（leptin）是一種由白色脂肪組織分泌的小分子量蛋白,肥胖人群中瘦素的血清含量往往升高。Dumond等人報道OA患者關(guān)節(jié)液中的瘦素含量明顯高于正常人,這種現(xiàn)象提示瘦素可能在OA疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中起到某種作用。RhoA蛋白是調(diào)控細(xì)胞骨架的重要分子之一,OA軟骨細(xì)胞與正常軟骨細(xì)胞相比,前者細(xì)胞骨架含量明顯升高。這也是兩者在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的顯著差異之一。馮覺非等報道,大劑量瘦素不但不能激活RhoA蛋白,反而會導(dǎo)致軟骨細(xì)胞逐漸皺縮,最終在細(xì)胞膜表面出現(xiàn)類似凋亡小體的小泡。為驗證瘦素是否可以在某些條件下激活細(xì)胞骨架調(diào)控蛋白RhoA,進而通過RhoA/LIMK1/Cofilin信號通路引起OA軟骨細(xì)胞細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,本文使用較低濃度的瘦素（1Ong/ml）作用于體外培養(yǎng)的OA軟骨細(xì)胞,并利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）法與Western blot法檢測RhoA/LIMK1/Cofilin信號通路中關(guān)鍵蛋白的活性,探討低濃度瘦... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
實驗一 人類OA軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)
    一、實驗材料
    二、實驗方法
    三、實驗結(jié)果
    四、實驗討論
    五、實驗結(jié)論
實驗二 電轉(zhuǎn)染質(zhì)粒至體外培養(yǎng)的人傳代OA軟骨細(xì)胞
    一、實驗材料
    二、實驗方法
    三、實驗結(jié)果
    四、實驗討論
    五、實驗結(jié)論
實驗三 用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)法研究瘦素對OA軟骨細(xì)胞細(xì)胞骨架調(diào)控蛋白RhoA的作用
    一、實驗背景及基本原理
    二、實驗材料
    三、實驗方法
    四、實驗結(jié)果
    五、實驗討論
    六、實驗結(jié)論
實驗四 利用Western blot方法檢測瘦素刺激后體外培養(yǎng)的人傳代OA軟骨細(xì)胞中LIMk1和Phospho-LIMK1
    一、實驗材料
    二、實驗方法
    三、實驗結(jié)果
    四、實驗討論
    五、實驗結(jié)論
實驗五 利用Western blot方法檢測瘦素刺激后體外培養(yǎng)的人傳代OA軟骨細(xì)胞中Cofilin和Phospho-Cofilin
    一、實驗材料
    二、實驗方法
    三、實驗結(jié)果
    四、實驗討論
    五、實驗結(jié)論
實驗六 細(xì)胞骨架肌動蛋白(F-actin)的免疫熒光染色
    一、實驗材料
    二、實驗方法
    三、實驗結(jié)果
    四、實驗討論
    五、實驗結(jié)論
實驗結(jié)論
問題與展望
References
文獻綜述 RhoA/ROCK激酶信號通路與細(xì)胞骨架蛋白F-actin
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3167751