細菌表面展示技術作為噬菌體表面展示技術的有益補充，已被廣泛用于生命科學各個領域。而構建基因工程減毒活疫苗是研究細菌展示系統(tǒng)的最初動因，也是這一系統(tǒng)最活躍的研究方向。但以往研究多是將已知抗原片段或表位展示于細菌表面用作實驗性活菌苗。本研究提出了從細菌展示隨機肽庫篩選獲得的抗原表位直接用作應急疫苗的新思路。 本研究首先以針對HBV pres的單克隆抗體為模型，生物淘洗商品化細菌鞭毛展示隨機十二肽庫，獲得該抗體抗原模擬表位，核心序列為R-RG-Y，與HBV preS蛋白的135-140氨基酸同源；將展示模擬表位的菌體克隆直接免疫小鼠，可獲得針對HBV preS蛋白的高滴度、高特異性抗體，表明從細菌展示隨機肽庫中篩選獲得的抗原表位直接用于應急疫苗研制是可行的。 為克服常規(guī)生物淘洗在多抗表位篩選中的不足，以HBV preS單抗為靶分子利用FACS對模擬文庫以及隨機肽庫FliTrx^TM進行篩選，在此基礎上建立消減FACS分選HBV preS免疫血清多克隆抗體抗原表位的方法，為今后從病人血清樣品中進行抗原表位的篩選奠定了基礎。 為更好地獲得不同形式抗體的抗原表... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

FliTrxHBV-pres(+)不一r一iTrxHBv-pres卜)的PCR鑒定Fig2.2IdentifieationofFliTrxHBv-pres(+)andFliTrxHBV-pres(一)bypeR..一

與利用羊抗鼠FITC標記二抗系統(tǒng)所得結(jié)果基本一致，表明:抗體的生物素化效果較好，同時也表明Fli腸xHBV-p‘es(+)和Fli玩HBV-pros卜)在結(jié)合篩選抗體3B9方面確有差異，這都

有部分未完全酶切的pFvHp載體，將完全酶切后載體采用低熔點膠回收，并進行去磷酸化處理，再進行瓊脂糖凝膠電泳，回收獲得片段與酶切后樣品的電泳行為完全一致(圖3.3)。23222027圖3.3載體酶切與回收產(chǎn)物瓊脂糖電泳圖譜Fig3.3SePerationofPFvHpandPurifiedlinearPFvHpon1.00/0agroseM:人oNA/HindllloNAmarke:A:pFvHp質(zhì)粒B:sfil酶切后PFvHp質(zhì)粒C:低熔點膠回收的線性化pFvHp3.3.2隨機寡核昔酸插入片段的制備隨機寡核營酸雙鏈插入片段由兩條寡核普酸片段經(jīng)退火、延伸補平以及酶切過程而獲得的。所設計的兩條寡核普酸退火延伸補平獲得片段大小約為84bp的片段，經(jīng)sfil酶切去除兩端的保護堿基，獲得片段的大小約為63bp，經(jīng)18%聚丙烯酞胺凝膠電泳分離，二者電泳行為有顯著差異，分子量大小均與預期相符(圖3.4)。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3143146