發(fā)布時(shí)間：2021-04-17 08:36

　　細(xì)菌表面展示技術(shù)作為噬菌體表面展示技術(shù)的有益補(bǔ)充，已被廣泛用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。而構(gòu)建基因工程減毒活疫苗是研究細(xì)菌展示系統(tǒng)的最初動(dòng)因，也是這一系統(tǒng)最活躍的研究方向。但以往研究多是將已知抗原片段或表位展示于細(xì)菌表面用作實(shí)驗(yàn)性活菌苗。本研究提出了從細(xì)菌展示隨機(jī)肽庫篩選獲得的抗原表位直接用作應(yīng)急疫苗的新思路。 本研究首先以針對(duì)HBV pres的單克隆抗體為模型，生物淘洗商品化細(xì)菌鞭毛展示隨機(jī)十二肽庫，獲得該抗體抗原模擬表位，核心序列為R-RG-Y，與HBV preS蛋白的135-140氨基酸同源；將展示模擬表位的菌體克隆直接免疫小鼠，可獲得針對(duì)HBV preS蛋白的高滴度、高特異性抗體，表明從細(xì)菌展示隨機(jī)肽庫中篩選獲得的抗原表位直接用于應(yīng)急疫苗研制是可行的。 為克服常規(guī)生物淘洗在多抗表位篩選中的不足，以HBV preS單抗為靶分子利用FACS對(duì)模擬文庫以及隨機(jī)肽庫FliTrx^TM進(jìn)行篩選，在此基礎(chǔ)上建立消減FACS分選HBV preS免疫血清多克隆抗體抗原表位的方法，為今后從病人血清樣品中進(jìn)行抗原表位的篩選奠定了基礎(chǔ)。 為更好地獲得不同形式抗體的抗原表... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

FliTrxHBV-pres(+)不一r一iTrxHBv-pres卜)的PCR鑒定Fig2.2IdentifieationofFliTrxHBv-pres(+)andFliTrxHBV-pres(一)bypeR..一

與利用羊抗鼠FITC標(biāo)記二抗系統(tǒng)所得結(jié)果基本一致，表明:抗體的生物素化效果較好，同時(shí)也表明Fli腸xHBV-p‘es(+)和Fli玩HBV-pros卜)在結(jié)合篩選抗體3B9方面確有差異，這都

有部分未完全酶切的pFvHp載體，將完全酶切后載體采用低熔點(diǎn)膠回收，并進(jìn)行去磷酸化處理，再進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，回收獲得片段與酶切后樣品的電泳行為完全一致(圖3.3)。23222027圖3.3載體酶切與回收產(chǎn)物瓊脂糖電泳圖譜Fig3.3SePerationofPFvHpandPurifiedlinearPFvHpon1.00/0agroseM:人oNA/HindllloNAmarke:A:pFvHp質(zhì)粒B:sfil酶切后PFvHp質(zhì)粒C:低熔點(diǎn)膠回收的線性化pFvHp3.3.2隨機(jī)寡核昔酸插入片段的制備隨機(jī)寡核營(yíng)酸雙鏈插入片段由兩條寡核普酸片段經(jīng)退火、延伸補(bǔ)平以及酶切過程而獲得的。所設(shè)計(jì)的兩條寡核普酸退火延伸補(bǔ)平獲得片段大小約為84bp的片段，經(jīng)sfil酶切去除兩端的保護(hù)堿基，獲得片段的大小約為63bp，經(jīng)18%聚丙烯酞胺凝膠電泳分離，二者電泳行為有顯著差異，分子量大小均與預(yù)期相符(圖3.4)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3143146