目的研究線粒體載體家族蛋白（MCFP）基因敲除對小鼠肝臟線粒體功能的影響。方法利用CRISP/Cas9技術(shù)建立MCFP基因敲除小鼠模型,并檢測小鼠體質(zhì)量、臟器系數(shù)、血生化以及糖代謝情況。分離小鼠原代肝實質(zhì)細(xì)胞檢測線粒體膜電位。提取肝臟線粒體,檢測三磷酸腺苷（ATP）、活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）水平,利用非變性凝膠電泳偶聯(lián)凝膠內(nèi)酶活染色,檢測線粒體呼吸鏈復(fù)合體活性。結(jié)果與同窩對照小鼠相比,MCFP敲除小鼠生理指標(biāo)無明顯差異,但線粒體膜電位及ATP水平降低,呼吸鏈復(fù)合體活性下降、ROS升高、SOD活性下降、MDA含量增加。結(jié)論 MCFP基因敲除造成肝臟線粒體功能異常,提示MCFP在線粒體抗氧化損傷及合成ATP過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。 

【文章來源】：軍事醫(yī)學(xué). 2019,43(08)北大核心

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【部分圖文】：

MCFP基因敲除小鼠的鑒定

MCFP-KO小鼠體質(zhì)量、臟器比及糖代謝分析（n=8)

MCFP定位于線粒體內(nèi)膜，MCFP敲除是否影響肝臟線粒體功能。為此，我們首先分離了小鼠肝實質(zhì)細(xì)胞，JC-1染色后流式細(xì)胞術(shù)分析線粒體膜電位的變化。結(jié)果顯示，MCFP敲除后，小鼠肝實質(zhì)細(xì)胞線粒體膜電位下降，并具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。由于正常的膜電位是維持線粒體氧化磷酸化、產(chǎn)生ATP的先決條件，故隨后檢測了線粒體ATP的產(chǎn)量。結(jié)果顯示，MCFP敲除明顯降低了ATP水平且具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05，圖3）。上述結(jié)果說明，MCFP敲除破壞了線粒體膜電位，抑制了ATP產(chǎn)能，降低了線粒體功能。2.4 MCFP敲除小鼠肝線粒體呼吸鏈復(fù)合體活性下降

【參考文獻】：
碩士論文
[1]基于線粒體膜間隙蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的基因功能研究[D]. 曾志鋒.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2009



本文編號：3142686