A組輪狀病毒是引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體,全球每年由于輪狀病毒感染導致的死亡約453,000人,造成嚴重的社會負擔和經濟負擔。安全、有效的疫苗是控制輪狀病毒感染和發(fā)病的重要手段。目前已有兩種輪狀病毒口服疫苗經FDA批準上市,分別為默克的RotateqTM和葛蘭素史克的RotarixTM,但在亞州與非州等輪狀病毒高負擔地區(qū)的保護率顯著低于歐美等發(fā)達國家和地區(qū),且二者作為減毒活疫苗均存在一定的安全風險。因此,開發(fā)一種更加安全、有效的疫苗對控制輪狀病毒的感染與發(fā)病,特別是嚴重腹瀉和死亡具有重要意義�；蚬こ瘫磉_的病毒樣顆粒疫苗被認為是一種較為理想的輪狀病毒候選疫苗,但目前輪狀病毒病毒樣顆粒的大規(guī)模制備還存在一定的挑戰(zhàn)。在本人碩士階段和本團隊其他人員的研究中,我們已經在大腸桿菌中成功表達輪狀病毒的結構蛋白VP2和VP6,并在體外成功的組裝了病毒樣顆粒VP6-VLP和VP2/6-VLP。本研究主要對原核表達的VP6、VP6-VLP和dl2/6-VLP的理化性質和免疫保護性進行研究,綜合考察其作為輪狀病毒候選疫苗的可行性。首先,通過比較與15株由天然病毒免疫制備的單克隆抗體的反應性發(fā)現,dl2/6... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：139 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１輪狀病毒結構示意圖Ｈｌ??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｒｏｔａｖｉｒｕｓ??

發(fā)生相互作用，其復制酶活性需要ＶＰ２蛋白的參與［７，８］，轉錄酶活性需要ＶＰ６蛋白??的參與［９］。??ＶＰ２是主要的核心蛋白，在結構上以ａ螺旋為主（圖２），由ＶＰ２Ａ和ＶＰ２Ｂ形??成不對稱的二聚體進而組裝形成Ｔ＝１的病毒核心顆粒［１（）］。ＶＰ２為核酸結合蛋白，研??究表明，１？９２ａａ與其核酸結合能力密切相關，Ｎ端缺失９２ａａ的ＶＰ２蛋白不具有核??酸結合能力［１１１，也不能與ＶＰ１和ＶＰ３發(fā)生相互作用［１２］，但仍能組裝形成病毒樣顆??粒，且將其替換成ＤｓＲｅｄ或輪狀病毒的ＶＰ８蛋白也均不影響ＶＰ２病毒樣顆粒的組??裝［１３］。??ＶＰ１和ＶＰ３均位于ＶＰ２五倍軸的頂點［１４］，?ＶＰ３為核酸結合蛋白，但其只能識??另ｉＪｓｓＲＮＡ，且對序列無嚴格要求，此外，ＶＰ３還具有鳥苷酸轉移酶活性［｜５１和甲基轉??移酶活性［１６］，為ＲＮＡ加帽。??Ａ?ｎｅｉｇｈｂｏｒｉｎｇ?ｍｏｎｏｍｅｒｓ?ｂ??（ｍｓ

ｒＶ輪狀病毒蛋白總量的５０％以上，是輪狀病毐分組的依據［１７］。ＶＰ６蛋白由兩個結構??域構成，分別為由１？１５０?ａａ和３３５？３９７?ａａ構成的Ｂ結構域和由１５１？３３４?ａａ構成的??Ｈ結構域，其中Ｂ結構域以ａ螺旋為主，Ｈ結構域以｜３折疊為主（圖３）?［１８１。在天??然病毒中，ＶＰ６以三聚體的形式存在，Ｈ結構域和Ｂ結構域均參與三聚體的形成，??但Ｈ結構域間的相互作用以疏水相互作用為主，是維持ＶＰ６三聚體穩(wěn)定的主嬰因??素，這與缺火突變的結果是一致的，ｌｆｎ２５Ｋ３９７?ａａ是ＶＰ６蛋白組裝形成病毒樣顆粒??的必需區(qū)域１１９，２（）］。在體外，單獨的ＶＰ６也可以組裝形成球狀或管狀顆粒，其形態(tài)與??ｐＨ和離子強度密切相關［２１］。??ＶＰ６蛋白介于病毐的核心和外衣殼之間，在輪狀病毐的組裝中發(fā)揮著重要的作??用。ＶＰ６蛋白與ＶＰ２相互作用的區(qū)域主要位于６５？７１?ａａ，與ＶＰ２之間主要是疏水??相互作用（圖３），且ＶＰ６與ＶＰ２的相互作用是輪狀病毐轉錄酶活性所必霈的Ｈ。??ＶＰ６與ＶＰ７相互作用的區(qū)域位于２７１？３４２?ａａ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人輪狀病毒實驗感染成年樹鼩的研究(摘要)[J]. 萬新邦,龐其方,丘福禧,胥愛源,張勝泉.  醫(yī)學研究通訊. 1982(03)

碩士論文
[1]輪狀病毒結構蛋白在大腸桿菌中的表達及其類病毒顆粒的體外組裝[D]. 李廷棟.廈門大學 2009



本文編號：3131101