本文關鍵詞：重組人堿性成纖維細胞生長因子對脂肪干細胞分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的 本實驗目的在于探討不同濃度重組人堿性成纖維細胞生長因子(Recombinant Human FGF-basic, rh-bFGF)對體外培養(yǎng)的人脂肪源干細胞(human adipose-derived stem cells, hAS Cs)誘導分化為脂肪細胞的影響,通過觀察hASCs誘導分化為脂肪細胞中新形成脂滴出現(xiàn)的時間、新形成脂肪細胞的增殖速率和成熟脂滴表面定位蛋白CIDEC的表達量,從而尋找體外促進hASCs向脂肪細胞分化所需加入rh-bFGF的最佳濃度。 材料與方法 1.鄭大五附院健康抽脂患者獲得脂肪混懸液,采用膠原酶消化的方法,分離、提取hASCs,進行體外培養(yǎng)、擴增,在顯微鏡下進行細胞形態(tài)的觀察,臺盼藍染色后對hASCs進行計數(shù),應用流式細胞儀進行細胞表型的鑒定。將傳至第三代的細胞進行成脂誘導并用油紅O染色對其進行鑒定。 2. hASCs傳至第三代時,分四組進行成脂誘導,將加入Ong/ml rh-bFGF的設為對照組,將加入10ng/mlrh-bFGF,20ng/ml rh-bFGF,40ng/ml rh-bFGF設為實驗組。各組分別用油紅O染色連續(xù)監(jiān)測脂滴出現(xiàn)時間,并比較其差異是否有統(tǒng)計學意義。 3.各組分別于加入不同濃度的rh-bFGF之后的12h、24h、48h用MTT比色法檢測hASCs誘導分化為脂肪細胞的細胞增殖率。 4.各組在成脂誘導的14d時,運用western印跡法檢測成熟脂滴定位蛋白CIDEC的蛋白表達量,并比較其差異。 結果 1.體外提取、培養(yǎng)的hASCs光鏡下觀察成梭形,流式細胞儀鑒定其表型均符合hASCs標準,成脂誘導第7天后鏡下觀察到大小不一的脂滴,油紅O染色呈陽性。 2.各組在油紅O染色時定性記錄脂滴出現(xiàn)時間,實驗組和對照組之間平均出現(xiàn)脂滴時間比較p0.05,差異有統(tǒng)計學意義。實驗組各組間比較差異有統(tǒng)計學意義。其中40ng/ml rh-bFGF出現(xiàn)脂滴平均時間為(11.5±1.9)h。 3.各組分別加入不同濃度rh-bFGF后的12h、24h、48h,MTT比色法檢測新形成脂肪細胞的增殖率。其中40ng/ml rh-bFGF的吸光度平均值為0.522±0.100。 4. Western印跡法檢測實驗組和對照組新形成脂滴表面定位蛋白CIDEC的表達量并進行比較,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)。 結論 實驗組能縮短體外hASCs分化為脂肪細胞的時間和促進成脂細胞的增殖,脂滴表面蛋白CIDEC表達量隨著實驗組濃度升高而持續(xù)增加。其中以40ng/ml rh-bFGF為最佳濃度。
【關鍵詞】：脂肪干細胞 重組人堿性成纖維細胞生長因子 脂肪細胞 誘導分化
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文~.略詞對照表10-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-23
• 結果23-26
• 討論26-30
• 參考文獻30-33
• 附圖33-43
• 綜述43-62
• 參考文獻56-62
• 個人簡歷、在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果62-63
• 致謝63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李衛(wèi)華;孫志成;王文;李淑艷;;堿性成纖維細胞生長因子對人前脂肪細胞增殖和分化的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年45期

2 王陽,戚可名,馬越波,劉珍君,趙玉明,王友彬,霍孟華,石蕾,童成國,丁玉虎;我院自體脂肪顆粒注射移植十年回顧[J];中華整形外科雜志;2002年02期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李煩繁;CIDEC在人脂肪細胞分化中的作用及其機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

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本文編號：312983