一種纖溶酶SPFE-Ⅲ的生物制備、分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究
發(fā)布時(shí)間:2021-04-08 12:37
血栓栓塞性疾病主要包括腦血栓、心肌梗死、靜脈血栓等,是目前臨床上死亡率最高的疾病之一,并且在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率正逐年上升,因此人們一直都在研制開(kāi)發(fā)新型的溶血栓藥物。本文從亞洲傳統(tǒng)發(fā)酵食品——蝦醬中篩選到一株產(chǎn)纖溶酶能力較強(qiáng)的菌株,由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心定名為Bacillus sp.nov.SK006(CCTCC NO.:M 205071),已經(jīng)證明該菌株能產(chǎn)生四種不同的纖溶酶,本文在優(yōu)化該菌產(chǎn)酶條件的基礎(chǔ)上,主要對(duì)芽孢桿菌Bacillus sp.nov.SK006產(chǎn)生的其中一種纖溶酶(SPFE-Ⅲ)作了深入的研究。首先在搖瓶水平上考察了培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件對(duì)Bacillus sp.nov.SK006發(fā)酵產(chǎn)纖溶酶能力的影響,結(jié)果表明該菌株產(chǎn)酶最佳的培養(yǎng)基組分為:葡萄糖20 g/L,胰蛋白胨30g/L,Na2HPO4·12H2O 15g/L,NaH2PO4·2H2O 1.3g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L...
【文章來(lái)源】:江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:66 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
為純化后的酶,
圖3名纖溶機(jī)制的研究Fig.3名 ThemeehanismofFibrinolytieEnzymesSpFE一I將純化后的酶稀釋成不同濃度后,分別在陽(yáng)性纖維蛋白平板(如圖3名中的b)和加熱過(guò)的陰性纖維蛋白平板(如圖3名中的a)上檢測(cè)纖溶活性,以此判斷纖溶酶SPFE一I溶解纖維蛋白的作用方式。結(jié)果如圖3名所示:結(jié)果發(fā)現(xiàn)纖溶酶SPFE一I在兩種平板上的溶栓透明圈直徑幾乎相同,即兩種方法測(cè)得的酶活幾乎相同;這表明該纖溶酶SPFE一I對(duì)纖維蛋白有直接降解作用,而目前報(bào)道的尿激酶和納豆激酶不但能直接溶解纖維蛋白而且能激活纖溶酶原轉(zhuǎn)變成纖溶酶,因此,與這兩種纖溶酶對(duì)纖維蛋白的作用方式是不同的。從豆豉發(fā)現(xiàn)的QK一1和QK一并不能激活纖維酶原1100],它們也是通過(guò)直接降解纖維蛋白發(fā)揮溶栓作用的,纖溶酶sPFE一I和QK在對(duì)纖維蛋白的作用方式上相同。3.3.4.2纖溶酶SPFE一I對(duì)纖維蛋白的降解過(guò)程的研究纖維蛋白原(人礴衍卜纖維蛋白單體(.街》凝血醉原一凝血酶!纖維蛋白多體(。御)矛{+纖維蛋白膚^(FA){:十纖維蛋白肚B作B)}(可溶)纖維蛋白穩(wěn)定因子X(jué)扭交聯(lián)的纖維蛋白多體(不溶)(,街2)P圖3刁纖維蛋白形成示意圖Fig.3刁 Forrnationoffibrin纖維蛋白原的分子是由三對(duì)兩兩相同的膚鏈(稱為a鏈 63.5kDa)、p鏈(56切a)和Y鏈 (47kDa)組成的二聚體
江南大學(xué){吹1學(xué)位論文將纖維蛋白的形成機(jī)制總結(jié)歸納如圖3刁所示,纖維蛋白是分子結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生根本變化的纖維蛋白原的多聚物,纖維蛋白單體借助氫健和疏水鍵聚合為可溶性的不穩(wěn)定的纖維蛋白多聚體后,再經(jīng)凝血因子xma轉(zhuǎn)酞胺(由凝血酶激活因子xlll(纖維蛋白穩(wěn)定因子)產(chǎn)生)反應(yīng)和ca2+的作用,使多聚體內(nèi)分子間形成共價(jià)鍵,以Y,二聚體和a一多聚體方式交聯(lián),成為穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白。纖溶酶對(duì)纖維蛋白和纖維蛋白原的降解產(chǎn)物基本相同,無(wú)突出的新片斷出現(xiàn),因?yàn)槔w維蛋白原比纖維蛋白的溶解度高
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]豆豉纖溶酶生產(chǎn)菌發(fā)酵液營(yíng)養(yǎng)和活性成分分析[J]. 王衛(wèi)東,孫月娥. 現(xiàn)代食品科技. 2006(02)
[2]豆豉纖溶酶產(chǎn)生菌發(fā)酵條件研究[J]. 吳思方,向梅,陶琳,孟凡濤. 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2004(06)
[3]高活性豆豉纖溶酶產(chǎn)生菌出發(fā)菌株的篩選[J]. 齊海萍,錢(qián)和,王璋,許時(shí)嬰. 中國(guó)調(diào)味品. 2004(02)
[4]納豆菌的分離鑒定及其抗菌活性[J]. 鐘青萍,謝俊杰,余世望. 食品科學(xué). 2002(10)
[5]枯草桿菌DC-2納豆激酶基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表達(dá)[J]. 彭勇,黃慶,張義正. 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2002(05)
[6]納豆激酶基因在E.coli HB101中的初步表達(dá)研究[J]. 羅立新,黃志立,楊汝德,凌均建,梁世中. 微生物學(xué)通報(bào). 2002(03)
[7]折多山納豆生產(chǎn)菌株的分離與篩選[J]. 陳波,賀新生,張玲. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2002(05)
[8]納豆激酶酶原基因和納豆激酶基因的克隆及在大腸桿菌中表達(dá)[J]. 余榕捷,汪炬,謝秋玲,洪岸. 生物技術(shù). 2002(03)
[9]納豆激酶基因的克隆及其在枯草桿菌中的表達(dá)[J]. 劉北域,宋后燕. 生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào). 2002(03)
[10]解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)DC-4產(chǎn)豆豉溶栓酶發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 彭勇,張義正. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2002(04)
本文編號(hào):3125567
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【文章頁(yè)數(shù)】:66 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
為純化后的酶,
圖3名纖溶機(jī)制的研究Fig.3名 ThemeehanismofFibrinolytieEnzymesSpFE一I將純化后的酶稀釋成不同濃度后,分別在陽(yáng)性纖維蛋白平板(如圖3名中的b)和加熱過(guò)的陰性纖維蛋白平板(如圖3名中的a)上檢測(cè)纖溶活性,以此判斷纖溶酶SPFE一I溶解纖維蛋白的作用方式。結(jié)果如圖3名所示:結(jié)果發(fā)現(xiàn)纖溶酶SPFE一I在兩種平板上的溶栓透明圈直徑幾乎相同,即兩種方法測(cè)得的酶活幾乎相同;這表明該纖溶酶SPFE一I對(duì)纖維蛋白有直接降解作用,而目前報(bào)道的尿激酶和納豆激酶不但能直接溶解纖維蛋白而且能激活纖溶酶原轉(zhuǎn)變成纖溶酶,因此,與這兩種纖溶酶對(duì)纖維蛋白的作用方式是不同的。從豆豉發(fā)現(xiàn)的QK一1和QK一并不能激活纖維酶原1100],它們也是通過(guò)直接降解纖維蛋白發(fā)揮溶栓作用的,纖溶酶sPFE一I和QK在對(duì)纖維蛋白的作用方式上相同。3.3.4.2纖溶酶SPFE一I對(duì)纖維蛋白的降解過(guò)程的研究纖維蛋白原(人礴衍卜纖維蛋白單體(.街》凝血醉原一凝血酶!纖維蛋白多體(。御)矛{+纖維蛋白膚^(FA){:十纖維蛋白肚B作B)}(可溶)纖維蛋白穩(wěn)定因子X(jué)扭交聯(lián)的纖維蛋白多體(不溶)(,街2)P圖3刁纖維蛋白形成示意圖Fig.3刁 Forrnationoffibrin纖維蛋白原的分子是由三對(duì)兩兩相同的膚鏈(稱為a鏈 63.5kDa)、p鏈(56切a)和Y鏈 (47kDa)組成的二聚體
江南大學(xué){吹1學(xué)位論文將纖維蛋白的形成機(jī)制總結(jié)歸納如圖3刁所示,纖維蛋白是分子結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生根本變化的纖維蛋白原的多聚物,纖維蛋白單體借助氫健和疏水鍵聚合為可溶性的不穩(wěn)定的纖維蛋白多聚體后,再經(jīng)凝血因子xma轉(zhuǎn)酞胺(由凝血酶激活因子xlll(纖維蛋白穩(wěn)定因子)產(chǎn)生)反應(yīng)和ca2+的作用,使多聚體內(nèi)分子間形成共價(jià)鍵,以Y,二聚體和a一多聚體方式交聯(lián),成為穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白。纖溶酶對(duì)纖維蛋白和纖維蛋白原的降解產(chǎn)物基本相同,無(wú)突出的新片斷出現(xiàn),因?yàn)槔w維蛋白原比纖維蛋白的溶解度高
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]豆豉纖溶酶生產(chǎn)菌發(fā)酵液營(yíng)養(yǎng)和活性成分分析[J]. 王衛(wèi)東,孫月娥. 現(xiàn)代食品科技. 2006(02)
[2]豆豉纖溶酶產(chǎn)生菌發(fā)酵條件研究[J]. 吳思方,向梅,陶琳,孟凡濤. 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2004(06)
[3]高活性豆豉纖溶酶產(chǎn)生菌出發(fā)菌株的篩選[J]. 齊海萍,錢(qián)和,王璋,許時(shí)嬰. 中國(guó)調(diào)味品. 2004(02)
[4]納豆菌的分離鑒定及其抗菌活性[J]. 鐘青萍,謝俊杰,余世望. 食品科學(xué). 2002(10)
[5]枯草桿菌DC-2納豆激酶基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表達(dá)[J]. 彭勇,黃慶,張義正. 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2002(05)
[6]納豆激酶基因在E.coli HB101中的初步表達(dá)研究[J]. 羅立新,黃志立,楊汝德,凌均建,梁世中. 微生物學(xué)通報(bào). 2002(03)
[7]折多山納豆生產(chǎn)菌株的分離與篩選[J]. 陳波,賀新生,張玲. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2002(05)
[8]納豆激酶酶原基因和納豆激酶基因的克隆及在大腸桿菌中表達(dá)[J]. 余榕捷,汪炬,謝秋玲,洪岸. 生物技術(shù). 2002(03)
[9]納豆激酶基因的克隆及其在枯草桿菌中的表達(dá)[J]. 劉北域,宋后燕. 生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào). 2002(03)
[10]解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)DC-4產(chǎn)豆豉溶栓酶發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 彭勇,張義正. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2002(04)
本文編號(hào):3125567
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