核糖核酸酶抑制因子（ribonuclease inhibitor,RI）是胞漿內(nèi)的一種酸性蛋白質(zhì).已有研究證明,RI與核糖核酸酶A（RNase A）和血管生成素（angiogenin,ANG）結(jié)合可抑制其活性.本室前期實(shí)驗(yàn)證實(shí),RI可有效抑制某些腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移.然而,RI抑制腫瘤的分子機(jī)制尚不清楚.本研究探討RI對小鼠黑色素瘤B16-F10細(xì)胞生長和凋亡的影響及其機(jī)制.MTT法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果證明,RI基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染導(dǎo)致B16-F10黑色素瘤細(xì)胞S期阻滯,抑制B16-F10黑色素瘤細(xì)胞增殖.Annexin V/PI結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,RI過表達(dá)引起細(xì)胞凋亡.與此相一致,蛋白質(zhì)印跡分析顯示,過表達(dá)RI引起抗凋亡分子Bcl-2表達(dá)下調(diào),而Bax上調(diào),同時伴有Pro-casepase 3激活.C57BL/6小鼠移植成瘤實(shí)驗(yàn)顯示,與對照相比,轉(zhuǎn)染RI的B16-F10細(xì)胞形成的腫瘤重量顯著減少,同時伴有腫瘤組織微血管密度降低.提示RI過表達(dá)能抑制微血管生成.此外,體內(nèi)外組織/細(xì)胞免疫化學(xué)和蛋白質(zhì)印跡結(jié)果揭示,過表達(dá)RI可顯著抑制整合素連接激酶（integrin-linked kinas... 

【文章來源】：中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2015,31(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1. 1 材料
    1. 2p IRES2-EGFP-RI 真核表達(dá)載體的 構(gòu) 建 與 鑒定
    1. 3 黑色素瘤 B16-F10 細(xì)胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
    1. 4 RI 基因表達(dá)的檢測
    1. 5 細(xì)胞免疫熒光檢測
    1. 6 MTT 檢測細(xì)胞的增殖
    1. 7 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期及凋亡
    1. 8 TUNEL 及 Hochest 33342 檢測細(xì)胞和腫瘤組 織凋亡
    1. 9 Western 印跡檢測凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)及 ILK 信 號通路蛋白質(zhì)的表達(dá)
    1. 10檢測上調(diào)RI對B16-F10細(xì)胞生長、凋亡的影響
    1. 11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2. 1 重組質(zhì)粒 p IRES2-EGFP-RI 的鑒定
    2. 2 B16-F10 細(xì)胞過表達(dá) RI 的鑒定
    2. 3過表達(dá) RI 對細(xì)胞增殖活力及細(xì)胞周期的 影響
    2. 4 過表達(dá) RI 對細(xì)胞凋亡的影響
    2. 5 過表達(dá) RI 對 ILK / PI3K / AKT 信號通路蛋白 質(zhì)表達(dá)的影響
    2. 6過表達(dá) RI 對黑色素瘤細(xì)胞小鼠移植瘤生長 和血管生成的影響
    2. 7 過表達(dá) RI 對體內(nèi)腫瘤組織 ILK / PI3K / AKT 信號通路蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
3 討論



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