核糖核酸酶抑制因子（ribonuclease inhibitor,RI）是胞漿內的一種酸性蛋白質.已有研究證明,RI與核糖核酸酶A（RNase A）和血管生成素（angiogenin,ANG）結合可抑制其活性.本室前期實驗證實,RI可有效抑制某些腫瘤的生長和轉移.然而,RI抑制腫瘤的分子機制尚不清楚.本研究探討RI對小鼠黑色素瘤B16-F10細胞生長和凋亡的影響及其機制.MTT法結合流式細胞術分析結果證明,RI基因穩(wěn)定轉染導致B16-F10黑色素瘤細胞S期阻滯,抑制B16-F10黑色素瘤細胞增殖.Annexin V/PI結合流式細胞術結果顯示,RI過表達引起細胞凋亡.與此相一致,蛋白質印跡分析顯示,過表達RI引起抗凋亡分子Bcl-2表達下調,而Bax上調,同時伴有Pro-casepase 3激活.C57BL/6小鼠移植成瘤實驗顯示,與對照相比,轉染RI的B16-F10細胞形成的腫瘤重量顯著減少,同時伴有腫瘤組織微血管密度降低.提示RI過表達能抑制微血管生成.此外,體內外組織/細胞免疫化學和蛋白質印跡結果揭示,過表達RI可顯著抑制整合素連接激酶（integrin-linked kinas... 

【文章來源】：中國生物化學與分子生物學報. 2015,31(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1. 1 材料
    1. 2p IRES2-EGFP-RI 真核表達載體的 構 建 與 鑒定
    1. 3 黑色素瘤 B16-F10 細胞的培養(yǎng)及轉染
    1. 4 RI 基因表達的檢測
    1. 5 細胞免疫熒光檢測
    1. 6 MTT 檢測細胞的增殖
    1. 7 流式細胞術分析細胞周期及凋亡
    1. 8 TUNEL 及 Hochest 33342 檢測細胞和腫瘤組 織凋亡
    1. 9 Western 印跡檢測凋亡相關蛋白質及 ILK 信 號通路蛋白質的表達
    1. 10檢測上調RI對B16-F10細胞生長、凋亡的影響
    1. 11 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2. 1 重組質粒 p IRES2-EGFP-RI 的鑒定
    2. 2 B16-F10 細胞過表達 RI 的鑒定
    2. 3過表達 RI 對細胞增殖活力及細胞周期的 影響
    2. 4 過表達 RI 對細胞凋亡的影響
    2. 5 過表達 RI 對 ILK / PI3K / AKT 信號通路蛋白 質表達的影響
    2. 6過表達 RI 對黑色素瘤細胞小鼠移植瘤生長 和血管生成的影響
    2. 7 過表達 RI 對體內腫瘤組織 ILK / PI3K / AKT 信號通路蛋白質表達的影響
3 討論



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