漢灘病毒（HTNV）主要引起腎綜合征出血熱（HFRS）,迄今尚無特異、有效的治療藥物�？笻TNV鼠源性單克隆抗體（mAb）,雖然有較好的抗病毒作用,但應(yīng)用于人體可能產(chǎn)生抗鼠抗體。而人源性mAb制備困難、產(chǎn)量低,目前也難以應(yīng)用�；蚬こ炭贵w在原核系統(tǒng)中表達(dá)雖然產(chǎn)量較高,但由于其受加工修飾功能的限制,會(huì)影響表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)特性;而真核表達(dá)又存在表達(dá)量低的難題。運(yùn)用合適的植物表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)抗體不僅表達(dá)產(chǎn)量高,而且由于植物表達(dá)系統(tǒng)有良好的加工修飾功能,其表達(dá)產(chǎn)物能保持良好的生物學(xué)特性。本研究用基因工程技術(shù)構(gòu)建了鼠/人嵌合抗體基因,并將其導(dǎo)入擬南芥內(nèi),嘗試在植物體內(nèi)表達(dá),主要方法和結(jié)果如下:1.將抗HTNV鼠源性mAb 3G1的可變區(qū)基因及人抗體恒定區(qū)基因進(jìn)行拼接,構(gòu)建了植物嵌合表達(dá)載體3G1MH-pCAMBIA2301,轉(zhuǎn)化入根瘤農(nóng)桿菌中,利用根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的抽真空轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)化野生型擬南芥,獲得轉(zhuǎn)基因植株。提取T0代轉(zhuǎn)基因植株基因組DNA,應(yīng)用針對(duì)輕、重鏈序列的特異性引物進(jìn)行PCR檢測(cè),篩選出整合有目的基因的陽性植株。以輕、重鏈探針對(duì)RNA進(jìn)行Northern Blot檢測(cè),檢測(cè)出完整的輕、重... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pBI121載體Fig1-1ThemapofthepBI121vector

圖 1-2 pCAMBIA2301 載體Fig 1-2 The map of the pCAMBIA2301 vector酶DNA聚合酶購自MBI公司TaKaRa公司。DNA限制性內(nèi)切酶接酶等主要分子生物學(xué)試劑購自TaKaRa公司。試劑盒小量質(zhì)粒提取試劑盒購自博大泰克公司。DNA純化試劑盒（CONCERTTMRapid Gel Extraction Systemo公司。緩沖液及試劑的配制菌培養(yǎng)基 LB 培養(yǎng)液：1%Tryptone （Oxide LTD），0.5%Yeast Extrac

圖 2 SP- 3G1VH 片段的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果 2 PCR amplification of SP- 3G1VH fra：DNA Marker；2, 3, 4：Amplified prod1 2bp20001000900750500250100圖 3 CH 片段的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果3 PCR amplification of CH fragmentDNA Marker；2：Amplified product

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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