漢灘病毒（HTNV）主要引起腎綜合征出血熱（HFRS）,迄今尚無特異、有效的治療藥物�？笻TNV鼠源性單克隆抗體（mAb）,雖然有較好的抗病毒作用,但應用于人體可能產生抗鼠抗體。而人源性mAb制備困難、產量低,目前也難以應用。基因工程抗體在原核系統(tǒng)中表達雖然產量較高,但由于其受加工修飾功能的限制,會影響表達產物的生物學特性;而真核表達又存在表達量低的難題。運用合適的植物表達系統(tǒng)表達抗體不僅表達產量高,而且由于植物表達系統(tǒng)有良好的加工修飾功能,其表達產物能保持良好的生物學特性。本研究用基因工程技術構建了鼠/人嵌合抗體基因,并將其導入擬南芥內,嘗試在植物體內表達,主要方法和結果如下:1.將抗HTNV鼠源性mAb 3G1的可變區(qū)基因及人抗體恒定區(qū)基因進行拼接,構建了植物嵌合表達載體3G1MH-pCAMBIA2301,轉化入根瘤農桿菌中,利用根瘤農桿菌介導的抽真空轉基因技術轉化野生型擬南芥,獲得轉基因植株。提取T0代轉基因植株基因組DNA,應用針對輕、重鏈序列的特異性引物進行PCR檢測,篩選出整合有目的基因的陽性植株。以輕、重鏈探針對RNA進行Northern Blot檢測,檢測出完整的輕、重... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

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圖 1-2 pCAMBIA2301 載體Fig 1-2 The map of the pCAMBIA2301 vector酶DNA聚合酶購自MBI公司TaKaRa公司。DNA限制性內切酶接酶等主要分子生物學試劑購自TaKaRa公司。試劑盒小量質粒提取試劑盒購自博大泰克公司。DNA純化試劑盒（CONCERTTMRapid Gel Extraction Systemo公司。緩沖液及試劑的配制菌培養(yǎng)基 LB 培養(yǎng)液：1%Tryptone （Oxide LTD），0.5%Yeast Extrac

圖 2 SP- 3G1VH 片段的 PCR 擴增結果 2 PCR amplification of SP- 3G1VH fra：DNA Marker；2, 3, 4：Amplified prod1 2bp20001000900750500250100圖 3 CH 片段的 PCR 擴增結果3 PCR amplification of CH fragmentDNA Marker；2：Amplified product

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3105094