目的通過(guò)原核基因工程技術(shù)獲得登革2型病毒（DENV2）包膜蛋白第Ⅲ結(jié)構(gòu)域（EDⅢ）重組蛋白,檢測(cè)其抑制登革病毒感染細(xì)胞的效率。方法利用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)擴(kuò)增DENV2編碼EDⅢ重組蛋白的基因片段,構(gòu)建pET28b（+）-EDⅢ原核表達(dá)載體并在大腸埃希菌中誘導(dǎo)EDⅢ重組蛋白表達(dá),進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。將登革病毒感染VeroE6細(xì)胞（經(jīng)EDⅢ重組蛋白孵育）,根據(jù)空斑減少數(shù)量計(jì)算EDⅢ重組蛋白對(duì)登革病毒感染的抑制率。結(jié)果成功表達(dá)并純化EDⅢ重組蛋白。EDⅢ重組蛋白可以抑制登革病毒感染的VeroE6細(xì)胞,且抑制率與蛋白水平呈正相關(guān),當(dāng)?shù)鞍姿綖?00μg/mL時(shí),病毒抑制率為90.5%。結(jié)論 DENV2EDⅢ重組蛋白能夠抑制DENV2吸附和感染細(xì)胞,為以EDⅢ重組蛋白為靶標(biāo)研制藥物和疫苗提供重要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床. 2019,16(16)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株及載體來(lái)源
    1.2 儀器與試劑
    1.3 方法
        1.3.1 表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        1.3.2 EDⅢ重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        1.3.3 EDⅢ重組蛋白的鑒定
        1.3.4 EDⅢ重組蛋白抑制DENV感染細(xì)胞
2 結(jié)果
    2.1 重組原核表達(dá)載體pET28b（+）-EDⅢ的鑒定
    2.2 EDⅢ重組蛋白的表達(dá)與純化
    2.3 重組蛋白EDⅢ的質(zhì)譜鑒定
    2.4 EDⅢ重組蛋白抑制DENV感染VeroE6細(xì)胞
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]登革病毒包膜EDⅢ蛋白廣譜中和抗體識(shí)別表位鑒定[J]. 易海粟,溫坤,朱偉,陳靜,車小燕,富寧,吳玉章.  免疫學(xué)雜志. 2015(07)
[2]登革病毒重組包膜蛋白表達(dá)及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]. 郭勇暉.  廣東醫(yī)學(xué). 2012(09)



本文編號(hào)：3037607