畢赤酵母表達系統(tǒng)是目前最為成功的外源蛋白表達系統(tǒng)之一。該系統(tǒng)操控簡單、經濟,表達量高,具有翻譯后修飾的能力,不存在原核表達系統(tǒng)內毒素難以去除的問題,也不存在哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的病毒和支原體污染問題。目前已有多種外源蛋白在該系統(tǒng)中成功表達。我們利用該系統(tǒng)表達了幾種重組蛋白。 1.復合干擾素突變體 根據畢赤酵母密碼子偏性合成了復合干擾素突變體基因,構建了分泌型酵母表達載體,線性化后轉化GS115。在發(fā)酵罐中進行了高密度發(fā)酵,表達量為112mg/L,發(fā)酵上清經超濾、三步層析純化獲得純度大于98%的重組蛋白,比活性大于6×10⁸IU/mg。 2.人干擾素-β1a 合成了人IFN-β1a基因,構建了酵母表達載體,線性化后轉化GS115。甲醇誘導轉化子,細胞病變抑制法測定誘導上清的抗病毒活性,培養(yǎng)上清中的表達量為2×10⁵IU/mL。 3.組織型纖溶酶原激活劑衍生物rPAm 構建了rPAm的酵母表達載體,并在畢赤酵母分泌表達,培養(yǎng)上清中的表達量為1.6mg/L。 4.Thr6-PDGF-BB 構建了Thr... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

發(fā)酵上清的SDS一APGE結果

圖1.8發(fā)酵上清的SDS一APGE結果1誘導前的培養(yǎng)上清2，3誘導后的培養(yǎng)上清M低分子量標準蛋白圖1.9三步層析純化的SDS~PAGE結果1.SPXL洗脫峰經DTT處理PhenylS‘SuPerdexPeharoes洗脫峰經DTT處理75洗脫峰經DTI，處理4.低分子量標準蛋白5.PhenvlSPehoares洗脫峰經DTT處理6.SPuedrex75洗脫峰經DTT處理.25純化產物的理化性質分析利用PE公司的491蛋白序列分析儀，采用自動Edmna降解法對畢赤酵母分泌表達的復合干擾素突變體的N端巧個氨基酸進行序列測定的結果為:CDLPQ一THLsG-NRRAL，與理論一致(圖1.10)。說明酵母細胞對重組蛋白的N端剪切正確，該重組蛋白可用于臨床用藥。

復合干擾素突變體質譜測定圖譜

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3036389