發(fā)布時(shí)間：2017-04-13 04:23

  本文關(guān)鍵詞：ELISPOT和IP-10檢測(cè)用于結(jié)核病診斷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的可侵犯全身多系統(tǒng)多器官的疾病。近年來(lái)，由于HIV感染流行、耐藥結(jié)核的產(chǎn)生、人口流動(dòng)和免疫抑制劑的應(yīng)用增多等原因，全球結(jié)核病疫情進(jìn)一步加重，，每年約有800萬(wàn)新發(fā)結(jié)核病患者，有300萬(wàn)人死于結(jié)核病，結(jié)核病是引起死亡的第二大感染性疾病。我國(guó)現(xiàn)有活動(dòng)性肺結(jié)核病人約500萬(wàn)，每年約有13萬(wàn)人死于結(jié)核病。結(jié)核病的診斷金標(biāo)準(zhǔn)是在痰、體液和/或病理樣本中找到結(jié)核分枝桿菌。痰菌陽(yáng)性的肺結(jié)核病人是結(jié)核病的主要傳染源，但活動(dòng)性肺結(jié)核病人中約有74%表現(xiàn)為痰菌陰性，缺乏診斷的金指標(biāo)，容易與肺部常見(jiàn)疾�。ㄈ缂�(xì)菌性肺炎和支氣管肺癌）混淆。結(jié)核性腦膜炎屬于重癥結(jié)核，能否早期診治對(duì)其預(yù)后意義重大，但臨床上，能從細(xì)菌學(xué)或病理學(xué)上確診結(jié)核性腦膜炎（TBM）的可能性低下，診斷困難。誤診或診斷延遲不僅造成個(gè)體預(yù)后不佳，同時(shí)增加群體結(jié)核病患病的壓力。 機(jī)體感染結(jié)核分枝桿菌后，體內(nèi)產(chǎn)生記憶性的T淋巴細(xì)胞（主要是Th1細(xì)胞），再次接觸結(jié)核桿菌特異性抗原時(shí)產(chǎn)生和分泌IFN-γ。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)是一種IFN-γ釋放試驗(yàn)（IGRA），其較為成熟的方法是T-SPOT.TB試驗(yàn)，試劑盒已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床，CDC為其制定了使用指南。ELISPOT通過(guò)計(jì)數(shù)有效釋放IFN-γ的細(xì)胞，可以發(fā)現(xiàn)Mtb的潛伏感染、輔助診斷活動(dòng)性結(jié)核病。應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌所特有的ESAT-6、CFP-10作為刺激抗原，不受卡介苗和非結(jié)核分枝桿（NTM）菌感染的影響，因此許多實(shí)驗(yàn)證明ELISPOT不僅能夠證實(shí)結(jié)核分枝桿菌感染的存在，而且對(duì)肺結(jié)核診斷具有較高的特異性和一定的敏感性。研究顯示結(jié)核抗原特異性T細(xì)胞有向病變部位集中的特點(diǎn)，感染局部的體液中可能存在比較多的結(jié)核分枝桿菌特異性細(xì)胞，因此我們推測(cè)，應(yīng)用ELISPOT方法檢測(cè)腦脊液，將提高結(jié)核性腦膜炎的診斷效率。本研究通過(guò)ELISPOT檢測(cè)腦脊液和血中分泌IFN-γ的細(xì)胞數(shù)，并與抗酸桿菌涂片、分枝桿菌培養(yǎng)、熒光定量PCR、結(jié)核抗體檢測(cè)等臨床檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果表明ELISPOT檢測(cè)腦脊液細(xì)胞具有較高的敏感性和特異性，聯(lián)合檢測(cè)血和腦脊液ELISOPT能夠提高診斷效率，可以作為結(jié)核性腦膜炎的輔助診斷方法，為結(jié)核性腦膜炎的早期診斷治療提供依據(jù)。 IP-10是由IFN-γ或脂多糖誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種趨化因子，屬于趨化因子CXC亞家族，在炎癥部位對(duì)淋巴細(xì)胞的活化和趨化起重要作用。IP-10的表達(dá)與IFN-γ的水平密切相關(guān)，作為IFN-γ誘導(dǎo)產(chǎn)生的下游趨化因子，能夠顯著地?cái)U(kuò)大IFN-γ的信號(hào)功能，有研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌特異性肽融合抗原刺激肺結(jié)核患者的PBMCs能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生高濃度的IP-10。Ruhwald等人報(bào)道聯(lián)合檢測(cè)IP-10等因子，能夠提高干擾素釋放試驗(yàn)的敏感性。本研究用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原肽（ESAT-6、CFP-10）刺激活動(dòng)性肺結(jié)核和肺部常見(jiàn)疾�。�(xì)菌性肺炎和支氣管肺癌）患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗原特異反應(yīng)性IP-10水平，結(jié)果提示聯(lián)合檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗原特異反應(yīng)性IP-10和IFN-γ，能夠顯著提高結(jié)核病診斷敏感性和特異性，可以作為肺結(jié)核的一種輔助診斷方法。 目的 研究IFN-γ釋放試驗(yàn)（ELISPOT方法）對(duì)結(jié)核性腦膜炎的診斷價(jià)值；研究結(jié)核分枝桿菌抗原特異反應(yīng)性IP-10和IFN-γ對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值。 方法 1.利用ELISPOT檢測(cè)腦膜炎患者腦脊液和血中Mtb抗原特異性的IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)量。 2.采用FlowCytomix流式技術(shù)檢測(cè)肺結(jié)核和其他常見(jiàn)肺部疾病患者的PBMCs培養(yǎng)上清中特異性抗原反應(yīng)性IP-10和IFN-γ的濃度。 3.收集并記錄腦脊液抗酸染色涂片、分枝桿菌培養(yǎng)、熒光定量PCR、結(jié)核抗體檢測(cè)的結(jié)果。 結(jié)果 1.腦脊液ELISPOT檢測(cè)的敏感度為67.3%，特異度為89.2%，符合率為73.3%，PV+值為94.3%，對(duì)結(jié)核性腦膜炎具有較高的臨床診斷價(jià)值。 2.血ELISPOT檢測(cè)的敏感度為85.9%，特異度為41.9%，符合率為74.1%，PV+值為80.2%。比較血和腦脊液ELISPOT檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)血液檢測(cè)特異度較低，考慮與非結(jié)腦患者合并腦外結(jié)核相關(guān)。 3.聯(lián)合檢測(cè)腦脊液和外周血T-SPOT.TB敏感性為91.1%，特異性96.4%。 4.分別比較腦脊液ELISPOT檢測(cè)與結(jié)核抗體、熒光定量PCR、抗酸桿菌染色和分枝桿菌培養(yǎng)檢測(cè)的結(jié)果，結(jié)果表明腦脊液ELISPOT檢測(cè)敏感性顯著高 于其他檢測(cè)(P0.05)。 5.采用FlowCytomix技術(shù)檢測(cè)外周血PBMCs培養(yǎng)上清中的IP-10和IFN-γ的濃度，結(jié)果表明肺結(jié)核組顯著高于正常對(duì)照組和常見(jiàn)肺病組。 6.肺結(jié)核患者PBMCs經(jīng)結(jié)核抗原刺激后IP-10和IFN-γ濃度呈正相關(guān)；聯(lián)合檢測(cè)IP-10和IFN-γ能夠顯著提高診斷肺結(jié)核的敏感性和特異性。 結(jié)論 1.腦脊液ELISPOT檢測(cè)在結(jié)核性腦膜炎診斷具有較高的敏感性和特異性，可以作為結(jié)核性腦膜炎的輔助診斷，有利于早期診斷結(jié)核性腦膜炎。聯(lián)合腦脊液與血的ELISPOT檢測(cè)能提高結(jié)核性腦膜炎診斷的敏感性和特異性。 2.聯(lián)合檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗原特異反應(yīng)性IP-10和IFN-γ，能夠顯著提高肺結(jié)核診斷的敏感性和特異性。
【關(guān)鍵詞】：ELISPOT FlowCytomix IFN-γ IP-10 結(jié)核病
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R378.911
【目錄】：

• 縮略詞表4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-18
• 第一部分 ELISPOT 檢測(cè)對(duì)結(jié)核性腦膜炎的診斷意義18-32
• 材料與方法18-24
• 結(jié)果24-30
• 討論30-32
• 第二部分 結(jié)核分枝桿菌特異性抗原反應(yīng)性 IP -10 的表達(dá)特點(diǎn)及診斷意義32-39
• 材料與方法32-34
• 結(jié)果34-37
• 討論37-39
• 總結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 文獻(xiàn)綜述43-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 發(fā)表論文49-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：ELISPOT和IP-10檢測(cè)用于結(jié)核病診斷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：302809