目的:構(gòu)建RNR3啟動(dòng)子調(diào)控的紅綠熒光蛋白雙信號(hào)發(fā)光酵母細(xì)胞,用于快速篩選化學(xué)誘變?cè)７椒?用PCR方法YIPlac204TC-NLS-DsRed-Express-2擴(kuò)增DsRed-Express-2紅色熒光蛋白,將其插入到pGPD載體,構(gòu)建成GPD啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的紅色熒光蛋白酵母報(bào)告載體（pGPD-DsRed-Express2）,用醋酸鋰方法將其轉(zhuǎn)化于RNR3啟動(dòng)子調(diào)控的綠色熒光蛋白（yEGFP）發(fā)光酵母細(xì)胞（W303-1A/RNR3-yEGFP）,從而構(gòu)建成紅、綠熒光蛋白雙信發(fā)光酵母細(xì)胞。紅色熒光蛋白（DsRed-Express-2）信號(hào)可用于校正細(xì)胞數(shù)和狀態(tài)不同對(duì)yEGFP發(fā)光的影響。用不同誘變?cè)謩e作用于該發(fā)光酵母細(xì)胞,于第0、4、8、12、16和20小時(shí),用黑色96孔酶標(biāo)板分別測(cè)紅、綠熒光蛋白的發(fā)光強(qiáng)度,用相對(duì)熒光強(qiáng)度（yEGFP/DsRed-Express2）描述誘變?cè)膭┝啃?yīng)關(guān)系。結(jié)果:在與DNA發(fā)生結(jié)合的化合物中,放線菌素D和溴乙錠均呈陰性;在與DNA發(fā)生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂（MMS）和瘤可寧呈陽(yáng)性結(jié)果,而絲裂霉素C呈陰性結(jié)果;在使DNA發(fā)生斷裂的誘變?cè)?順鉑、... 

【文章來(lái)源】：癌變·畸變·突變. 2019,31(04)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑和儀器
    1.2 RNR3啟動(dòng)子調(diào)控的綠熒光蛋白雙信號(hào)發(fā)光酵母細(xì)胞的建立
    1.3 RNR3調(diào)控的雙信號(hào)發(fā)光酵母細(xì)胞對(duì)誘變?cè)暮Y選研究
    1.4 統(tǒng)計(jì)方法
2 結(jié)果
    2.1 yEGFP和DsRed-Express-2發(fā)光效果
    2.2 雙發(fā)光重組酵母細(xì)胞對(duì)與DNA發(fā)生結(jié)合誘變?cè)暮Y選
    2.3 雙發(fā)光重組酵母細(xì)胞對(duì)使DNA發(fā)生烷基化誘變?cè)暮Y選
    2.4 雙發(fā)光重組酵母細(xì)胞對(duì)使DNA發(fā)生斷裂誘變?cè)暮Y選
    2.5 雙發(fā)光重組酵母細(xì)胞對(duì)抑制DNA合成酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶誘變?cè)暮Y選
    2.6 雙發(fā)光重組酵母細(xì)胞對(duì)其他生物化學(xué)毒性作用化合物的篩選
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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