骨骼是人體重要的組織器官，是機(jī)體機(jī)械運動的基礎(chǔ)。近年的研究發(fā)現(xiàn)，骨骼系統(tǒng)參與了生理及病理條件下機(jī)體代謝、內(nèi)分泌和造血功能的調(diào)控。良好的骨骼發(fā)育是機(jī)體健康的基礎(chǔ)，骨骼發(fā)育具體機(jī)制的深入探索對尋找骨骼疾病新的治療措施與方案具有重要意義。骨骼發(fā)育包括軟骨內(nèi)成骨和膜內(nèi)成骨兩種途徑，是一個高度有序、受到多種因素共同調(diào)控的過程。軟骨內(nèi)成骨是哺乳動物骨骼形成的主要途徑。成纖維細(xì)胞生長因子（Fibroblast growth factors，F(xiàn)GFs）及其受體成纖維細(xì)胞生長因子受體（Fibroblast growthfactor receptors，F(xiàn)GFRｓ）在調(diào)節(jié)軟骨內(nèi)成骨中發(fā)揮重要的作用。FGFR3屬于酪氨酸激酶受體家族，其基因突變與多種骨骼發(fā)育性疾病密切相關(guān)。通過對FGFR3基因工程小鼠的深入研究表明，F(xiàn)GFR3在骨骼發(fā)育調(diào)控中發(fā)揮重要作用。模擬人軟骨發(fā)育不全的FGFR3功能增強(qiáng)型（gain-of function）點突變小鼠模型（FGFR3G369C/+小鼠，即ACH小鼠）表現(xiàn)為身材短小，長骨生長板結(jié)構(gòu)紊亂，軟骨細(xì)胞增殖速度減慢。ACH小鼠軟骨細(xì)胞的分化受到抑制，表現(xiàn)為肥大軟骨細(xì)胞數(shù)量減少，... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

COS-7細(xì)胞內(nèi)pRK7-FGFR3與EGFP-VDR的共定位激光共聚焦顯鏡圖像，其中紅色代表pRK7-FGFR3，綠色代表EGFP-VDR，藍(lán)色代表DAPI核染色，兩種色彩疊加后橙黃色的信號即為共定位信號

第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文）COS-7 細(xì)胞內(nèi) YFP1-VDR 與 YFP2-FGFR3 的共定位實驗的原理是[1]將 YFP 蛋白分為兩個部分（即 YFP1 和 YFP2），各自分別究的分子，單獨的 YFP 亞基不會發(fā)光，當(dāng)兩種分子存在直接相互作用，在靠近時，可以使 YFP1 和 YFP2 兩個亞單位重新結(jié)合成完整的 YFP 蛋白，光。若兩種分子無相互作用，則無熒光出現(xiàn)。在 COS-7 細(xì)胞內(nèi)分別單獨-VDR、YFP2-FGFR3 作為陰性對照，實驗組共轉(zhuǎn)染 YFP1-VDR 與 YFP2-FG表達(dá)載體由本實驗室前期構(gòu)建）；陽性對照組采用 Cao 等[2]的方案，即共-TGFβR2 和 YFP2-PTH1R（轉(zhuǎn)染 24h 后 10-8M PTH 處理 5min），轉(zhuǎn)染 24h 后行共聚焦顯微鏡檢測，結(jié)果（圖 2）提示：陰性對照組（圖 2A）無熒光信性對照組（圖 2B）出現(xiàn)綠色熒光，與文獻(xiàn)報道相一致[2]，實驗組（圖 2C）C出現(xiàn)綠色熒光，提示 FGFR3 與 VDR 存在內(nèi)源性的共定位，共定位的位置。

第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2.3.1.2 FGFR3 與 VDR 在軟骨細(xì)胞內(nèi)存在直接的相互作用FGFR3 與 VDR 在空間位置存在共定位為二者的相互作用提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，然們利用免疫共沉淀技術(shù)進(jìn)一步研究 FGFR3 與 VDR 之間是否存在直接的相互作用果發(fā)現(xiàn)，在 ATDC5 細(xì)胞中，利用 FGFR3 特異的抗體可將 VDR 蛋白沉淀下來，組 IgG 不能將 VDR 特異性的沉淀下來（圖 3A）；在另外的試驗中，利用 VDR 的可將 FGFR3 蛋白特異性的沉淀下來（圖 3B）。該結(jié)果說明 FGFR3 與 VDR 存在性的直接相互作用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大劑量1,25二羥維生素D3對發(fā)育期小鼠骨穩(wěn)態(tài)的影響[J]. 黃啟釗,戚華兵,王曉鳳,朱瑩,王權(quán),王先行,杜曉蘭,陳林.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2014(08)
[2]骨鈣素介導(dǎo)的骨內(nèi)分泌系統(tǒng)[J]. 王春玉,龍豐云,陳香,余希杰.  中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志. 2013(03)
[3]構(gòu)建FGFR3基因沉默慢病毒載體及其對ATDC5細(xì)胞增殖和分化的影響[J]. 朱瑩,戚華兵,王權(quán),王曉鳳,黃啟釗,陳林.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2013(11)
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[5]軟骨細(xì)胞條件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增強(qiáng)型點突變小鼠的獲得及其表型初步分析[J]. 雷子賢,戚華兵,蘇楠,趙子瑜,陳錨錨,何啟芬,趙玲,金旻,謝楊麗,李福兵,杜曉蘭,陳林.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2009(01)
[6]FGFR3在骨骼發(fā)育和疾病中作用的研究進(jìn)展[J]. 蘇楠,陳林.  國際遺傳學(xué)雜志. 2006(03)



本文編號：3020961