瘧疾仍然是一種嚴(yán)重危害人類健康的寄生蟲病。據(jù)WHO最近統(tǒng)計，全世界有40％的人生活在瘧區(qū)，每年有3億人感染瘧疾，1.2億人發(fā)病，200萬人病死，僅非洲每年就有80萬兒童因瘧疾病死。約占瘧區(qū)兒童病死率的1／5。由于瘧原蟲抗藥性和蚊媒對殺蟲劑的耐受，使瘧疾的治療與控制更加困難。故疫苗的研制以及對瘧疾保護(hù)性免疫機(jī)理的研究將可為控制瘧疾提供有效的機(jī)會和手段。 自1973年Clyde以X-線照射瘧原蟲子孢子作為蟲體疫苗研究以來，國內(nèi)外還先后探索了各期蟲體的粗制蛋白、提純抗原蛋白，基因工程和人工合成肽亞單位（抗原表位）疫苗等各種瘧疾疫苗。但它們各以其疫苗來源困難、分子短小、修飾性差、免疫保護(hù)性差、免疫原性弱等致命缺陷而難獲成功，而且疫苗的設(shè)計、研究多限于B-細(xì)胞系統(tǒng)和B-細(xì)胞技術(shù)手段，即以瘧疾的免疫血清或抗瘧單抗篩選的蟲體抗原表位為候選瘧疾疫苗分子，其篩選的質(zhì)與量受抗體的克隆數(shù)的限制。新近對核酸疫苗的研究尚未獲得技術(shù)和效果上的突破。 如同其它真核細(xì)胞病原體疫苗尚未成功一樣，看來瘧疾疫苗的研究還有更深層的免疫機(jī)理及其相關(guān)的分子、細(xì)胞工藝過程需要了解、認(rèn)識和探索。 從流行病學(xué)、臨床觀... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pGDyn酶切后的瓊脂糖凝膠電泳分析

中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士生論文圖8PyDyn結(jié)構(gòu)示意圖dyn:mni為CTP酶活性結(jié)構(gòu)域，dynamin_2為中部保守結(jié)構(gòu)域，GED為GTP酶活性調(diào)控結(jié)構(gòu)域根據(jù)上述結(jié)果結(jié)合Pfam軟件(http://www.egr.ki.se/Pram/searel:.html)的預(yù)測(圖，15)，Pfdny蛋白包含如下結(jié)構(gòu)域:N端GTP酶活性結(jié)構(gòu)域，中部保守結(jié)構(gòu)域，非HP結(jié)構(gòu)域(D3)，GTP酶活性調(diào)控結(jié)構(gòu)域(GED)以及C端結(jié)構(gòu)域(DS)，如圖9示.MOdelSeq一Seq一HMM一HMM一SeorE-fromtofromtoevalUeA1ignmeDescriPtintOn

}l圖16pyDynDI，D3，DS在大腸桿菌中獲得表達(dá)(a)一6Hisveetorandveetorwithinsert:laneZ，3pETDIwithoutIPTGanwithoutIPTGandwithIPTG;lane6，7pETDSwithoutIPTGandwithIPT載體，蛋白Dl、D3和D5在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物分子量依次約為3k3d，一15pGEX一4卜l一GSTveetorandveetorwithinsert:Ianeg，10PGEXDIwit11，12pGEXD3withoutIPTGandwithIPTG:lane13，14pGEXDSwithoutIPTGaT一1一GST表達(dá)載體，蛋白D1、D3和D5在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物，分子量nes，15pGExT一4T一1一GsTveetorwithoutIPTGandwithIPTG.)“S，，為pGE大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)，分子量約為29kd.;:1低分子量蛋白Makrer97，“，免疫的純化和免疫血清的制備的變性蛋白產(chǎn)物經(jīng)鎳柱分離純化(Invitrgone公司產(chǎn)品)，顯示在pET一30(a)一6His載體中表達(dá)的純化蛋白Dl、D3、n氏佐劑，按10一15ug蛋白/只，免疫小鼠，1月后再以不完，加強(qiáng)免疫2次，間隔3周。末次免疫后2周，尾靜脈采血，1234567


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