本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化心肌樣細(xì)胞的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 心臟疾病的干細(xì)胞治療已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。干細(xì)胞治療心臟疾病及其作用機(jī)制亟待解決。在于細(xì)胞誘導(dǎo)分化心肌方面已多有報(bào)道,但大多集中在動(dòng)物來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞以及胚胎干細(xì)胞。近年來(lái),由于人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mysenchymal stem cells, HUCMSCs)來(lái)源豐富,擴(kuò)增和分化能力強(qiáng),免疫原性較低,不涉及倫理問題,成為誘導(dǎo)分化心肌的熱點(diǎn),但使用纈沙坦(valsartan)胎兒心臟組織勻漿(Human fetal heart tissue extracts, HFHTE)誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞未見報(bào)道。 目的 探討纈沙坦、胎兒心臟組織勻漿誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向分化心肌樣細(xì)胞(cardiomyogenic cells)的可行性,以及二者之間是否存在相互作用。 方法 1.細(xì)胞培養(yǎng)：HUCMSCs使用生長(zhǎng)培養(yǎng)液(含有10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100μg/mL鏈霉素的低糖DMEM培養(yǎng)液)在飽和濕度、37℃、5%C02的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),每3d換液一次。當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到80～90%時(shí),使用0.25%胰酶(pH7.4)消化細(xì)胞,按照1：2的比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 2.細(xì)胞誘導(dǎo)和分化：采用以下三種方案對(duì)]3UCMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)：(1)生長(zhǎng)培養(yǎng)液+valsartan誘導(dǎo)24h,之后換為生長(zhǎng)培養(yǎng)液分別繼續(xù)培養(yǎng)至1W、2W和3W；(2)生長(zhǎng)培養(yǎng)液+HFHTE誘導(dǎo)3d之后換為生長(zhǎng)培養(yǎng)液分別繼續(xù)培養(yǎng)至1W、2W和3W；(3)生長(zhǎng)培養(yǎng)液+valsartan+HFHTE誘導(dǎo)3d,之后換為生長(zhǎng)培養(yǎng)液分別繼續(xù)培養(yǎng)至1W、2W和3W。 3.通過(guò)Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)、Western blotting和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)Tbx5、GATA4、Nkx2.5、ANP、β-MHC、cTnl和cTnT的表達(dá)情況。 結(jié)果 1. RT-PCR、Western blotting和細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果顯示HUCMSCs在生長(zhǎng)培養(yǎng)液內(nèi)能表達(dá)心肌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Tbx5、Nkx2.5,但不表達(dá)心肌特異蛋白cTnI和cTnT以及心肌發(fā)育相關(guān)基因ANP和β-MHC。 2. Valsartan誘導(dǎo)HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表達(dá)均上升,隨后逐漸下降,峰值均在1W。3W時(shí)表達(dá)心肌特異蛋白cTnl(?)cTnT,但不表達(dá)心肌發(fā)育相關(guān)基因ANP和β-MHC。 3. HFHTE誘導(dǎo)HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表達(dá)均上升,隨后逐漸下降,峰值均在2W。3W時(shí)表達(dá)心肌特異蛋白cTnI和cTnT,但不表達(dá)心肌發(fā)育相關(guān)基因ANP和β-MHC。 4. Valsartan+HFHTE誘導(dǎo)HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表達(dá)均上升,隨后逐漸下降,其中Tbx5和Nkx2.5峰值在1W,GATA4峰值在2W。2W時(shí)開始表達(dá)心肌特異蛋白cTnI,3W時(shí)達(dá)到峰值。3W時(shí)表達(dá)心肌特異蛋白cTnT,2W和3W時(shí)微弱表達(dá)ANP,但不表達(dá)β-MHC。 結(jié)論 HUCMSCs在生長(zhǎng)培養(yǎng)液內(nèi)培養(yǎng)時(shí)能表達(dá)心肌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA4. Tbx5以及Nkx2.5,但不能自發(fā)向心肌樣細(xì)胞分化。Valsartan和HFHTE均能在體外誘導(dǎo)HUCMSCs向心肌樣細(xì)胞分化,并且二者之間存在相互作用,能夠促進(jìn)分化進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：纈沙坦 胎兒心臟組織勻漿 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 心肌樣細(xì)胞 分化
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 實(shí)驗(yàn)材料12-16
• 實(shí)驗(yàn)方法16-22
• 結(jié)果22-31
• 討論31-35
• 小結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化心肌樣細(xì)胞及其應(yīng)用的研究進(jìn)展39-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 附錄51-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況52-53
• 致謝53-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 江志羔;黃裕立;麥煒頤;;Wnt信號(hào)系統(tǒng)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的作用[J];國(guó)際內(nèi)科學(xué)雜志;2009年11期

2 宮立國(guó);邱廣蓉;徐小延;孫開來(lái);;心臟特異轉(zhuǎn)錄因子NKX2-5、TBX5、GATA4與先天性心臟病的研究進(jìn)展[J];國(guó)際遺傳學(xué)雜志;2006年02期

3 趙先鋒;徐予;宿昕;張雪亞;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在心肌梗塞移植治療中的研究進(jìn)展[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2011年03期

4 陳新云;曾智;饒莉;李勝富;周斌;陳玉成;;心臟營(yíng)養(yǎng)素-1對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞的作用[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年01期

5 孫麗;于麗;張華芳;江洪;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2011年02期

6 國(guó)海東;張貴燾;王海杰;王新艷;譚玉珍;;PI3-K/Akt信號(hào)通路對(duì)骨髓源性心肌干細(xì)胞分化的調(diào)控作用[J];解剖學(xué)報(bào);2008年04期

7 孫曉冬;董韜;于宏偉;楊志文;金明順;唐佳茵;趙丹;劉慧雯;;淫羊藿苷體外誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2011年02期

8 楊軍;王蘇燕;丁賽良;王光輝;鄧彪;張勇;褚春;伍衛(wèi);;纈沙坦抑制血管緊張素Ⅱ刺激下心肌細(xì)胞縫隙連接蛋白43表達(dá)的上調(diào)[J];中華老年心腦血管病雜志;2012年03期

9 紀(jì)艷;強(qiáng)衛(wèi)國(guó);;纈沙坦對(duì)巨噬細(xì)胞增殖、炎癥因子表達(dá)及活性氧生成的抑制作用[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年03期

10 林曉波;何紅燕;羅敏潔;崔冰琳;馮學(xué)永;蔣學(xué)武;謝慶東;黃天華;應(yīng)文娟;馬廉;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的研究[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2007年13期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 馮川;SAHA促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化及其作用機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化心肌樣細(xì)胞的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：297733