本文關鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細胞定向分化心肌樣細胞的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 心臟疾病的干細胞治療已成為人們關注的焦點。干細胞治療心臟疾病及其作用機制亟待解決。在于細胞誘導分化心肌方面已多有報道,但大多集中在動物來源的間充質(zhì)干細胞以及胚胎干細胞。近年來,由于人臍帶間充質(zhì)干細胞(Human umbilical cord mysenchymal stem cells, HUCMSCs)來源豐富,擴增和分化能力強,免疫原性較低,不涉及倫理問題,成為誘導分化心肌的熱點,但使用纈沙坦(valsartan)胎兒心臟組織勻漿(Human fetal heart tissue extracts, HFHTE)誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞未見報道。 目的 探討纈沙坦、胎兒心臟組織勻漿誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞體外定向分化心肌樣細胞(cardiomyogenic cells)的可行性,以及二者之間是否存在相互作用。 方法 1.細胞培養(yǎng)：HUCMSCs使用生長培養(yǎng)液(含有10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100μg/mL鏈霉素的低糖DMEM培養(yǎng)液)在飽和濕度、37℃、5%C02的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),每3d換液一次。當細胞融合達到80～90%時,使用0.25%胰酶(pH7.4)消化細胞,按照1：2的比例進行傳代培養(yǎng)。 2.細胞誘導和分化：采用以下三種方案對]3UCMSCs進行誘導：(1)生長培養(yǎng)液+valsartan誘導24h,之后換為生長培養(yǎng)液分別繼續(xù)培養(yǎng)至1W、2W和3W；(2)生長培養(yǎng)液+HFHTE誘導3d之后換為生長培養(yǎng)液分別繼續(xù)培養(yǎng)至1W、2W和3W；(3)生長培養(yǎng)液+valsartan+HFHTE誘導3d,之后換為生長培養(yǎng)液分別繼續(xù)培養(yǎng)至1W、2W和3W。 3.通過Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)、Western blotting和免疫細胞化學檢測Tbx5、GATA4、Nkx2.5、ANP、β-MHC、cTnl和cTnT的表達情況。 結果 1. RT-PCR、Western blotting和細胞免疫化學結果顯示HUCMSCs在生長培養(yǎng)液內(nèi)能表達心肌相關轉(zhuǎn)錄因子Tbx5、Nkx2.5,但不表達心肌特異蛋白cTnI和cTnT以及心肌發(fā)育相關基因ANP和β-MHC。 2. Valsartan誘導HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表達均上升,隨后逐漸下降,峰值均在1W。3W時表達心肌特異蛋白cTnl(?)cTnT,但不表達心肌發(fā)育相關基因ANP和β-MHC。 3. HFHTE誘導HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表達均上升,隨后逐漸下降,峰值均在2W。3W時表達心肌特異蛋白cTnI和cTnT,但不表達心肌發(fā)育相關基因ANP和β-MHC。 4. Valsartan+HFHTE誘導HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表達均上升,隨后逐漸下降,其中Tbx5和Nkx2.5峰值在1W,GATA4峰值在2W。2W時開始表達心肌特異蛋白cTnI,3W時達到峰值。3W時表達心肌特異蛋白cTnT,2W和3W時微弱表達ANP,但不表達β-MHC。 結論 HUCMSCs在生長培養(yǎng)液內(nèi)培養(yǎng)時能表達心肌相關轉(zhuǎn)錄因子GATA4. Tbx5以及Nkx2.5,但不能自發(fā)向心肌樣細胞分化。Valsartan和HFHTE均能在體外誘導HUCMSCs向心肌樣細胞分化,并且二者之間存在相互作用,能夠促進分化進程。
【關鍵詞】：纈沙坦 胎兒心臟組織勻漿 人臍帶間充質(zhì)干細胞 心肌樣細胞 分化
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 實驗材料12-16
• 實驗方法16-22
• 結果22-31
• 討論31-35
• 小結35-36
• 參考文獻36-39
• 綜述：人臍帶間充質(zhì)干細胞誘導分化心肌樣細胞及其應用的研究進展39-51
• 參考文獻46-51
• 附錄51-52
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況52-53
• 致謝53-54
• 個人簡歷54

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細胞定向分化心肌樣細胞的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：297733