本文關(guān)鍵詞：中國結(jié)核菌耐多藥和廣泛耐藥相關(guān)基因突變特征及MAS-PCR研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：分析中國耐多藥（MDR TB）和廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌（XDR TB）耐藥相關(guān)基因的突變特征；建立與之相應(yīng)的等位基因特異性多重聚合酶鏈反應(yīng)（multiplex allele specific PCR，MAS PCR）技術(shù)，以實(shí)現(xiàn)對MDR TB與XDR TB的快速檢測，為MDR TB與XDR TB的診斷和監(jiān)測提供新的技術(shù)手段。 材料和方法： 1.采用比例法藥敏試驗(yàn)，從全國23省收集的結(jié)核分枝桿菌菌株中篩選了230株MDR TB，27株XDR TB及64株敏感菌株用于本研究。研究菌株由中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室收集保藏并提供。 2.采用L-J培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株，并通過CTAB（溴化十六烷基三甲銨）法提取全基因組DNA用于耐藥相關(guān)基因的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物采用脫氧核糖核酸（DNA）測序分析。 3.利用基因測序技術(shù)，分別對321株試驗(yàn)菌株的katG基因，inhA調(diào)控區(qū)，ahpC－oxyR基因間隔區(qū)，，rpoB基因，gyrA, gyrB基因及rrs基因進(jìn)行序列分析。 4.根據(jù)我國MDR TB及XDR TB耐藥相關(guān)基因的突變特點(diǎn)，篩選與耐藥高度相關(guān)的基因突變位點(diǎn)，建立與之相應(yīng)的MAS PCR檢測技術(shù)，對MDR TB及XDR TB進(jìn)行快速檢測。 5．利用MAS PCR技術(shù)對湖南省200株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株（含MDR TB，XDR TB，敏感菌株）進(jìn)行檢測驗(yàn)證，并與傳統(tǒng)比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，評價(jià)MAS PCR技術(shù)的實(shí)用性。 結(jié)果： 1.257株耐多藥和廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌中，14.0%的菌株inhA基因發(fā)生突變，58.4%菌株的katG基因發(fā)生突變，16.7%菌株的oxyR-ahpC基因發(fā)生突變，同時(shí)考慮這三種基因，異煙肼耐藥相關(guān)基因突變檢出率可達(dá)79.8%；91.1%菌株的rpoB基因發(fā)生突變，67.1%菌株的gyrA基因發(fā)生突變，7.6%菌株的gyrB基因發(fā)生突變，40.0%菌株的rrs基因發(fā)生突變�；蛲蛔兊闹饕稽c(diǎn)為katG315（49.8%），inhA-15（9.4%），rpoB531（49.8%），526（22.6%）和516（10.5%），gyrA94（43.0%）和90（21.5%），rrs1401（40%）。 2.根據(jù)我國MDR TB及XDR TB耐藥相關(guān)基因的特點(diǎn)，建立了與之相應(yīng)的MAS PCR耐藥檢測技術(shù)。對200株臨床分離株（43株MDR，其中4株XDR）進(jìn)行了MAS-PCR檢測。MAS-PCR與比例法藥敏試驗(yàn)比較，異煙肼耐藥檢測的敏感性為72.5%（50/69），對利福平檢測的敏感性為77.0%（40/52），檢測氧氟沙星敏感性為66.7%（14/21），而卡那霉素為75%（3/4），四種藥物檢測的特異性均為100%。 結(jié)論： 1.我國耐多藥結(jié)核菌異煙肼、利福平、氧氟沙星和卡那霉素耐藥相關(guān)基因最常見突變?yōu)閗atG315、inhA-15，rpoB531、526和516, gyrA94和90，rrs1401。 2. MAS-PCR技術(shù)檢測MDR-及XDR-TB耐藥性簡便、快速、特異性高，對MDR-及XDR-TB耐藥早期診斷具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 耐多藥結(jié)核病 廣泛耐藥結(jié)核病 基因突變 MAS-PCR技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R446.5;R378.911
【目錄】：

• Abbreviation（縮略詞）4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-13
• 第一部分 中國耐多藥和廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌耐藥相關(guān)基因突變特征分析13-32
• 材料與方法13-19
• 一、實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 二、試驗(yàn)方法15-19
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-26
• 一、藥物敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-20
• 二、耐藥相關(guān)基因測序結(jié)果20-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 第二部分 MAS-PCR 技術(shù)用于診斷耐多藥和廣泛耐藥結(jié)核病的研究32-51
• 材料與方法32-39
• 一、實(shí)驗(yàn)材料32
• 二、實(shí)驗(yàn)方法32-39
• 結(jié)果39-44
• 1. 比例法檢測藥敏結(jié)果39-40
• 2. 測序結(jié)果40-42
• 3. MAS PCR 檢測結(jié)核分枝桿菌耐藥性結(jié)果42-44
• 討論44-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-51
• 本研究基金資助項(xiàng)目51-52
• 已發(fā)表文章52-53
• 文獻(xiàn)綜述53-65
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 譚昌淵;羅九甫;任兆瑞;;高分辨率熔解曲線分析—分子診斷的新技術(shù)[J];生命科學(xué)研究;2009年03期

2 劉宇紅,姜廣路,趙立平,李云絮,付育紅,畢志強(qiáng),王u&民;第四次全國結(jié)核病流調(diào)分支桿菌藥敏試驗(yàn)的方法學(xué)探討[J];中國防癆雜志;2003年01期

3 程曉東,于文彬,別良峰,蘇明權(quán),張榮,郝曉柯;多重聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析檢測耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2004年01期

4 韓喜琴,馬s

本文編號：296945