本文關(guān)鍵詞：基于慢性疲勞綜合征線蟲模型的中藥篩選及單體藥效研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome, CFS)由美國疾病控制和預防中心(CDC)于1988年正式命名,是一種持續(xù)時間≥6個月的原因不明的精神及軀體的亞健康狀態(tài),以疲勞、低熱(或自覺發(fā)熱)、咽喉痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛、頭痛、注意力不易集中、記憶力差、睡眠障礙和抑郁等非特異性表現(xiàn)為主的綜合征,無法自行緩解,臨床檢查多無明顯器質(zhì)性改變。近年來隨著社會生活方式改變,環(huán)境惡化等多方面因素影響,CFS發(fā)病人數(shù)呈逐年上升趨勢,好發(fā)年齡為30-50歲之間的青壯年階段,是白領(lǐng)工作人群早衰、猝死的重要危險因素,但現(xiàn)代醫(yī)學對CFS的防治措施十分有限。在中醫(yī)學中,CFS屬于“虛勞”等范疇,早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就對該類癥狀有詳細描述,治療方面也積累了豐富的經(jīng)驗。中醫(yī)學者認為CFS的病機以腎精虧虛為主,治療上多以補腎填精益氣為主,且處方用藥以自擬方和大方為主,對中藥資源的合理使用及CFS的中醫(yī)診療規(guī)范化均十分不利。因此從臨床治療常用方藥中篩選鑒定出對CFS具有確切療效的中藥具有重要意義。動物實驗中,小鼠CFS模型成本高、周期長、造模方式復雜且效果不夠穩(wěn)定,不適合作為初期的藥物篩選模型,而秀麗隱桿線蟲作為一種國際通用的模式生物,具有完整的神經(jīng)、運動、消化和生殖系統(tǒng),遺傳背景清晰,整體生命功能活動及相關(guān)調(diào)控路徑與人類具有高度同源性,且生存周期短,成本較低,符合實驗動物倫理要求,樣本量充足,可控性強,轉(zhuǎn)基因操作靈活,可以觀察到慢性應(yīng)激疾病逐步進展對線蟲壽命、行為、群體等多方面的影響,是適宜研究CFS的良好素材。本研究引入簡單模式生物秀麗線蟲及其轉(zhuǎn)基因株進行CFS相關(guān)研究。Aβ1-42轉(zhuǎn)基因秀麗線蟲株能模擬蛋白穩(wěn)態(tài)失衡所致CFS病理表現(xiàn),結(jié)合線蟲生存狀態(tài),能體現(xiàn)CFS縮短健康生存時間的整體疾病轉(zhuǎn)歸,并且成本低、周期短、檢測指標穩(wěn)定,是進行CFS相關(guān)藥物篩選的合適模型。本研究旨在嘗試利用線蟲模型篩選防治CFS中藥,并對藥物對CFS干預效果進行初步探索,為擴展后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。目的：1.嘗試利用轉(zhuǎn)基因線蟲模型模擬CFS蛋白穩(wěn)態(tài)失衡的病理環(huán)節(jié),篩選防治CFS的有效中藥;2.利用多種應(yīng)激線蟲模型模擬CFS相關(guān)病理環(huán)節(jié),以篩選出的補腎中藥制何首烏為例,探討其主要有效單體成分二苯乙烯苷對CFS線蟲模型的防治效果。方法：1.中藥篩選實驗：利用蛋白失衡應(yīng)激模型轉(zhuǎn)基因線蟲CL4176篩選藥物,分組為對照組及藥物干預各劑量組,對17種藥物進行干預效果檢測,觀察蛋白毒性誘導的應(yīng)激模式下,藥物對線蟲平均非癱瘓時間的作用效果;2.在高、中、低劑量組(TSG-125μM組、TSG-62.5μM組、TSG-25μM組)二苯乙烯苷干預下,觀察成年線蟲對體外環(huán)境的熱應(yīng)激(35℃)、氧化應(yīng)激(胡桃醌250μ g/mL)及體內(nèi)毒性蛋白應(yīng)激(A β 1-42轉(zhuǎn)基因突變株CIA176)的耐受能力和平均存活時間,并進一步評估二苯乙烯苷對正常狀態(tài)下線蟲平均生存時間、30s運動距離、第4天和第10天線蟲肌肉細胞GFP數(shù)目、30s咽泵運動頻次及生殖能力的作用效果。結(jié)果：1.利用蛋白失衡應(yīng)激模型轉(zhuǎn)基因線蟲CL4176進行中藥篩選：中藥顆粒溶液直接添加入線蟲標準培養(yǎng)基,從17種單味中藥顆粒中篩選出2種可延長線蟲模型平均非癱瘓時間的藥物：淫羊藿、制何首烏,以制何首烏效果最佳。2.與空白對照組比較,二苯乙烯苷TSG-125μM組、TSG-62.5μM組可減輕蛋白毒性作用(P0.05),高中低干預各組均能增加線蟲熱應(yīng)激存活時間(P0.05), TSG-125 μ M組可增加線蟲氧化應(yīng)激存活時間(P0.05)、TSG可右移野生型線蟲的生存曲線,延長線蟲平均生存時間及最大生存時間(P0.05)。與對照組比,高濃度干預組能增加線蟲的運動距離和咽泵運動頻次(P0.05),,延緩線蟲第4天和第10天肌肉細胞核GFP熒光強度和數(shù)目的衰減(P0.05)。生殖能力各組間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論：1.在利用轉(zhuǎn)基因秀麗線蟲CFS模型篩選17種單味中藥顆粒過程中,發(fā)現(xiàn)淫羊藿、制何首烏均可延長線蟲模型平均非癱瘓時間,以制何首烏效果最佳。2.制何首烏主要藥效成分二苯乙烯苷能增強線蟲對體內(nèi)外環(huán)境壓力的應(yīng)激能力,延長線蟲壽命,增加線蟲的運動距離和咽泵運動頻次,延緩線蟲肌肉細胞的流失的同時未干擾線蟲正常生殖力,可能成為防治人類CFS的有效藥物。這些工作為二苯乙烯苷在防治CFS方面的進一步機制探索及藥理研究打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：應(yīng)激 秀麗線蟲 中藥篩選 何首烏 二苯乙烯苷 慢性疲勞綜合征
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R285;R-332
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 利用轉(zhuǎn)基因線蟲蛋白失衡應(yīng)激模型篩選中藥13-27
• 1.1 實驗材料14-18
• 1.1.1 實驗生物14-15
• 1.1.2 主要試劑及藥物15-17
• 1.1.3 實驗儀器及設(shè)備17-18
• 1.2 實驗方法18-20
• 1.3 結(jié)果20-23
• 1.4 討論23-26
• 1.5 小結(jié)26-27
• 第二部分 TSG對慢性疲勞綜合征線蟲模型影響的研究27-46
• 2.1 實驗材料28-29
• 2.1.1 實驗生物28-29
• 2.1.2 主要試劑及藥物29
• 2.1.3 實驗儀器及設(shè)備29
• 2.2 檢測指標及方法29-33
• 2.3 結(jié)果33-40
• 2.4 討論40-45
• 2.5 小結(jié)45-46
• 研究結(jié)論及展望46-47
• 結(jié)論46
• 展望46-47
• 參考文獻47-53
• 綜述一53-60
• 參考文獻57-60
• 綜述二60-68
• 參考文獻65-68
• 致謝68-70
• 在讀期間所著文章和所獲獎勵70-71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 沈自尹,陳瑜,黃建華,胡作為;EF延緩HPAT軸衰老的基因表達譜研究[J];中國免疫學雜志;2004年01期

2 王文健;沈自尹;張新民;陳素珍;張玲娟;吳波水;;補腎法對老年男性下丘腦-垂體-性腺軸作用的臨床和實驗研究[J];中醫(yī)雜志;1986年04期

  本文關(guān)鍵詞：基于慢性疲勞綜合征線蟲模型的中藥篩選及單體藥效研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：296747