精子介導基因轉移（Sperm-mediated gene transfer, SMGT）是以精子為載體，在受精時將外源目的基因導入卵母細胞，是目前轉基因動物研究中簡單而高效的方法學之一。SMGT的核心是高效、穩(wěn)定的體外受精技術和精子轉染技術，前者不僅有利于獲得大量的胚胎來源，而且還對胚胎質(zhì)量以及胚胎移植后的胎兒發(fā)育和動物個體獲得有重要影響，后者是提高轉基因動物成功率的關鍵和保證。由于國內(nèi)外目前在山羊體外受精和精子轉染方面的研究尚不成熟，影響了我們即將開展的以精子介導方法為基礎的轉基因山羊乳腺生物反應器課題進程。為此，本實驗對山羊體外受精技術和精子轉染技術展開研究，以建立SMGT技術平臺，為轉基因山羊乳腺生物反應器的研制奠定基礎。本研究共分為5部分，第一、二、三部分分別就體外受精技術中的3個關鍵環(huán)節(jié)：卵母細胞成熟、精子獲能和受精、早期胚胎體外培養(yǎng)進行研究，探討體外受精影響因素，優(yōu)化培養(yǎng)系統(tǒng)，建立穩(wěn)定的體外胚胎生產(chǎn)體系。第四部分對精子供體選擇、外源DNA轉染精子的影響因素、精子內(nèi)化轉運機制以及轉染方法的優(yōu)化組合進行探討，建立山羊精子高效轉染方法。第五部分利用已建立的體外受精技術和精子轉染技... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮寫一覽表
英文摘要
中文摘要
論文正文
    前言
    第一章 山羊卵巢卵母細胞體外成熟的研究
        摘要
        引言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
    第二章 山羊精子體外獲能的研究
        摘要
        引言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
    第三章 山羊早期胚胎體外培養(yǎng)的研究
        摘要
        引言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
    第四章 外源DNA轉染山羊精子的研究
        摘要
        引言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
    第五章 精子介導法生產(chǎn)轉基因山羊早期胚胎的實驗研究
        摘要
        引言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
    全文總結
    致謝
文獻綜述
博士在讀期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]考馬斯亮藍染色評價哺乳動物精子頂體反應發(fā)生的效果[J]. 葉華虎,茍本富,劉盧生,倪勇,伍明山,魏泓.  第三軍醫(yī)大學學報. 2003(07)
[2]豬卵母細胞在不同培養(yǎng)液中成熟后的發(fā)育潛力[J]. 葉華虎,魏泓,陳俊穎.  第三軍醫(yī)大學學報. 2003(06)
[3]“兩步法”體外培養(yǎng)山羊卵母細胞的初步研究[J]. 邵華,孟和寶力高,張鎖鏈,旭日干.  內(nèi)蒙古大學學報(自然科學版). 2002(05)
[4]血清和促性腺激素對山羊卵母細胞核體外成熟的影響[J]. 馬所峰,苗義良,蘭國成,王子玉,常仲樂,譚景和.  中國獸醫(yī)學報. 2002(04)
[5]動物胚胎體外培養(yǎng)研究進展[J]. 張靖飛,李裕強,劉月鳳.  動物科學與動物醫(yī)學. 2002(02)
[6]精子載體介導法生產(chǎn)轉基因綿羊的研究[J]. 武堅,劉明軍,李文蓉,黃俊成,史洪才,郭志勤.  草食家畜. 2001(S2)
[7]雙色熒光原位雜交技術在異性間造血干細胞移植中的應用[J]. 李建勇,過宇,薛永權,吳德沛,夏學鳴,阮長耿.  中華血液學雜志. 2000(08)
[8]脂質(zhì)體介導外源基因體外轉染精子的研究[J]. 黃偉民,賴良學,喬桂林,岳軍明,安靚,王凱,付殿國,殷震,李進.  第一軍醫(yī)大學學報. 2000(03)
[9]豬不同直徑卵泡中卵母細胞體外培養(yǎng)的成熟潛力[J]. 韓毅冰,施維民,秦鵬春.  中國獸醫(yī)學報. 2000(02)
[10]電穿孔導入法在家兔精子基因轉移中的應用[J]. 黃偉民,喬貴林,趙君,賴良學,岳軍明,安靚,王凱,付殿國,殷震,李進.  中國獸醫(yī)學報. 2000(02)



本文編號：2958509