抗人纖維蛋白單鏈抗體scFv-8E5能特異性識別人纖維蛋白β鏈N端7肽，在血栓的定位診斷和導向溶栓治療等方面有很好的應用前景。但鼠源性單抗用于臨床的最大障礙是其高免疫原性，為了降低人抗鼠抗體反應，對scFv-8E5的重鏈和輕鏈可變區(qū)進行了人源化改造。從人免疫球蛋白基因數(shù)據(jù)庫中挑選到與鼠源scFv-8E5重鏈（VH-8E5）同源性73.0％的人源免疫球蛋白HUMHCH109重鏈（VH）序列，作為人源化改造VH-8E5的框架；與其輕鏈（VL-8E5）同源性76.3％的人源免疫球蛋白KLC400輕鏈（VL）序列，作為人源化改造VL-8E5的框架。人工合成人源化VH-8E5和VL-8E5片段，用DNA連接酶連接成完整的人源化VH-8E5和VL-8E5，構建表達載體pOPE101-huVH-8E5、pOPE101-huVL-8E5和pOPE101-huscFv-8E5。轉化JM109后用IPTG誘導表達。經(jīng)聚丙烯酰胺電泳和ELISA證明表達產(chǎn)物分子量30KDa左右，人源化重鏈和人源化輕鏈對scFv結合人纖維蛋白能力均無明顯影響，人源化scFv-8E5與親本抗體scFv-8E5活性無明顯差別，表明... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

合成DNA片段的連接產(chǎn)物

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34石‘7一圖3.poPEloz一huvH一sES重組子醉切鑒定(1.5%agarose，0.SXTBE，sv/em)infl，LaneZ:poPE一101一sES超螺旋(ds)，Lane1，Lane4:popE101一huvH一sESdigestedbyBglll，ne6:popE101一huvH一8E5digestedbyNeol、Hi

【參考文獻】：
期刊論文
[1]單鏈抗體分子與鏈親和素融合蛋白的制備<英文>[J]. 許靜,李文平,隋建華,宋增璇.  中國實驗血液學雜志. 1999(02)
[2]鼠抗體OKT3結合位點的結構模擬和改形設計[J]. 孫鍵,沈如群,徐琳,陳潤生,劉喜富,黃華梁.  生物物理學報. 1996(01)



本文編號：2936781