發(fā)布時間：2020-12-24 04:14

　　目的 慢性HBV感染是我國的常見病，迄今尚無滿意療法�；蛑委熓强共《局委熝芯康臒狳c，獲得高效靶向性導(dǎo)入載體是基因治療的關(guān)鍵。HBV具有天然嗜肝特性，能在肝細(xì)胞內(nèi)持續(xù)復(fù)制，反復(fù)感染，病毒本身對細(xì)胞無明顯細(xì)胞毒性。HBV具有作為肝靶向性基因治療載體的基本條件，與其它病毒載體相比，理論上具有明顯優(yōu)勢：它可以利用乙肝患者這個天然“包裝細(xì)胞”，將目的基因的嗜肝性及抗HBV作用在慢性HBV感染者體內(nèi)長期保持及放大；當(dāng)HBV復(fù)制水平下降時，重組HBV也將隨之減少或消失，有可能從根本上克服目前治療載體的缺陷。本課題對HBV基因組作了三種類型改造：（1）構(gòu)建C基因截短型HBV載體；（2）構(gòu)建包膜蛋白突變的HBV載體；（3）構(gòu)建核心蛋白和包膜蛋白聯(lián)合突變HBV載體，在細(xì)胞和分子水平上觀察它們的抗HBV作用，同時探討adw亞型C基因截短型HBV載體在ayw亞型缺失包裝信號輔助質(zhì)粒輔助下的復(fù)制和包裝。 方法 1、以野生型HBV質(zhì)粒adwR9為骨架，構(gòu)建C基因截短型、野生型C基因真核表達(dá)載體pcDNA3-△C（缺失核心蛋白的118-183aa）、pcDNA3-C和C基因截短型HBV載體pHBV-△C（缺... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖I一9熒光定量檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清和

、、800bn圖11一spHBV一msl、pHBV一ms酶切鑒定圖11一gpHBV一msls酶切鑒定lanel:adwRg，laneZ:PHBV一msllane3:PHBV一ms1Inel，2，3:PHBV一ms15lane4:marker2.重組單基因S突變體抗HBV作用2.1重組載體蛋白表達(dá)分別將adwRg、peDNA3一ms和peDNA3一3瞬時轉(zhuǎn)染HepGZ細(xì)胞，48小時后提取胞內(nèi)蛋白，采用Westernblot檢測蛋白表達(dá)情況。突變S蛋白的大小和野生型S蛋白一致，分子量約為27KD，見圖11一10

11一15熒光定量PCR檢測胞內(nèi)病毒量圖:2.279E+073:8.573E+08adwRg(胞內(nèi))2:1.893E斗08pHBV一msl(胞內(nèi))pHBV一ms(胞內(nèi))4:9.463E+09pHBV一ms1s(胞內(nèi))3presl、S基因聯(lián)合突變HBV突變體抗HBV作用將pHBV一ms15與adwRg共轉(zhuǎn)染HepGZ細(xì)胞，以peDNA3和adwRg染HepGZ細(xì)胞為對照。48小時后提取培養(yǎng)上清和胞內(nèi)病毒顆粒，采定量PCR檢測病毒量，結(jié)果見圖H一16，突變體與adwRg共轉(zhuǎn)染組胞量較對照組明顯增多，培養(yǎng)上清中病毒量較對照組少，提示包膜突變正常包膜蛋白相互作用，干擾成熟病毒顆粒分泌和包裝。月l·ooE刁。9的Q.尸叫1.00E-田7__________

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[5]重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體攜帶乙型肝炎病毒載體的構(gòu)建與表達(dá)[J]. 孫殿興,胡大榮,鄔光惠,胡學(xué)玲,李娟,范公忍.  中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志. 2002(02)
[6]逆轉(zhuǎn)錄病毒載體攜帶HBV載體表達(dá)顯性陰性突變體抗HBV作用的研究[J]. 孫殿興,胡大榮,鄔光惠,胡學(xué)玲,李娟,范公忍,鄧濤.  肝臟. 2001(S1)



本文編號：2934959