結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是導致結(jié)核病的病原菌。全球約有三分之一的人口感染結(jié)核分枝桿菌,每年約有兩百萬人死于結(jié)核病,因此結(jié)核病成為嚴重威脅人類健康的疾病之一。據(jù)估計,人類感染結(jié)核分枝桿菌后,只有10%的感染能夠轉(zhuǎn)化為活動性肺結(jié)核；在其余90%的感染中,細菌在宿主肺部存留維持代謝休眠狀態(tài)而進入潛伏感染期。結(jié)核分枝桿菌的潛伏感染在結(jié)核病發(fā)病機理中起非常重要的作用,但是目前相關(guān)的調(diào)節(jié)機制尚不明確。近年來已有研究證明結(jié)核分枝桿菌的廣譜脅迫蛋白(Universal Stress Protein,USP)家族與潛伏感染有關(guān),研究這類家族蛋白的功能,以期為結(jié)核分枝桿菌的潛伏感染研究提供一些線索。廣譜脅迫蛋白是一種古老且保守的蛋白家族,當細菌處于環(huán)境壓力脅迫情況下,比如營養(yǎng)物質(zhì)缺乏,缺氧,NO脅迫,生長環(huán)境中有重金屬離子等毒性物質(zhì)存在,熱休克以及DNA損傷等,該家族蛋白參與表達調(diào)控,有助于維持細菌在壓力下存活。感染宿主的結(jié)核分枝桿菌被巨噬細胞吞噬后逐步形成肉芽腫,此時的結(jié)核分枝桿菌恰好就處于氧氣、營養(yǎng)物質(zhì)缺乏的壓力環(huán)境中。結(jié)核分枝桿菌包含十個廣譜脅迫蛋... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

結(jié)核分枝桿菌USP除Rvl028和Rv2319以外的蛋白按照序列特點分類

Volume (ml)圖6: Rv2624c重組表達質(zhì)粒構(gòu)建及蛋白表達純化。（A) Rv2624c-pQE80L重組質(zhì)粒BamH I和EcoR I酶切鑒定結(jié)果，PQE80L箭頭處是載體位置，n，2(52介箭頭處是目的片段。（B)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入表達菌株Rosetta中表達情況。Lane 1&2：未誘導的和加入丨PTG誘導的Rosetta總蛋白；Lane 3&4：加入IPTG誘導的Rv2624c表達菌株裂解后上清&沉淀；Lane 5:蛋白Marker,從上到下依次是 170、130、100、70、55、40、35、25 (kD) ； Lane 6&7：經(jīng)親和層析后Rv2624c純蛋白考馬斯亮藍染色&WestemBlot鑒定，箭頭所指處即目的蛋白所在位置。（C)分子量標準品的分子蹄凝膠層析圖。（D) Rv2624c純蛋白的分子蹄凝膠層析圖。Fig6. (A) Construction of Rv2624c-pQE80L recombination DNA. (B) Expression and purificationof Rv2624c. Lanel to lane 6 is the coomassie brilliant blue dye. Lanel and Iane2 is thesupernatant and sediment of inductive Rosetta. Lane3 and lane4 is the supernatant and sed

具有ATP結(jié)合能力。將煮沸后的Rv2624c純蛋白離心后取上清，通過離子交換層析與標準品（圖7A)對比，證明純化所得的蛋白中含有ATP，和少量ADP、AMP (圖7B),而在細菌培養(yǎng)和純化蛋白的過程中并沒有加入外源的ATP，證明ATP是蛋白內(nèi)源結(jié)合的，說明Rv2624c具有結(jié)合ATP的能力，即Rv2624c是一個ATP結(jié)合蛋白。同時檢測出的ADP、AMP提示Rv2624c可能具有ATP酶活性。32


本文編號：2933318