抗體分子的研究及應用一直是免疫學乃至整個生物學研究的熱點。在生物制品中，抗體類占了很大的份額，因此抗體工程的發(fā)展倍受人們的關注�？贵w技術由最初的血清多克隆抗體發(fā)展到雜交瘤單克隆抗體技術，直到目前的基因工程抗體技術，尤其是噬菌體抗體庫技術的出現(xiàn)，將抗體工程推到了一個新的發(fā)展階段。甲型肝炎病毒(HAV)是危害人類健康的重要致病原之一，目前已有多種用于接觸前預防的甲肝疫苗。但對于接觸后預防或短期到HAV高流行區(qū)的旅游者的預防，則多采用免疫球蛋白作被動免疫。血源性免疫球蛋白雖然效價高，應用效果好，但可能被血源病原體污染，且浪費血源。因此基因工程人源抗體有望成為接觸后預防的首選制劑。為此，我們用HAV的細胞培養(yǎng)抗原對已有的人源噬菌體抗體庫進行篩選，獲得了與HAV抗原有結合活性的噬菌體抗體，并改建成Fab及全分子抗體，并用不同的表達系統(tǒng)進行了表達。 一、人源抗HAV Fab基因的克隆及可溶性表達 用抗體捕獲的HAV抗原對噬菌體抗體庫進行三輪淘篩，篩選出與HAV抗原有特異性結合能力的抗體，并對其重、輕鏈基因進行了序列測定，分析表明重鏈Fd基因屬IgG1亞類，輕鏈基因屬κ亞類。在此基礎上構... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

特異性噬菌體抗體競爭抑制性實驗Fig.l一1ComPetitiveihnibitionELISAofPhgaenatibodies

誘導的細菌沒有表達較大量的外源可溶性蛋白。而在包涵體部分，在相對分子量約25Dk的位置上出現(xiàn)兩條帶，表明有重組蛋白表達，表達產物主要以包涵體的形式存在(圖2一4)。經薄層掃描分析，重組蛋白占包涵體蛋白總量的39.1%。將包涵體經變性復性后，經免疫印跡檢測復性的可行性。按方法1.2.6，在透析過程中有大量的蛋白沉淀形成，但將透析后的產物離心取上清做免疫印跡時，未加還原劑的復性樣品僅在48Dk左右出現(xiàn)一特異條帶，而加還原劑后，在25Dk左右出現(xiàn)兩條帶(圖2一5)。該結果表明:雖然在復性過程中會損失很多蛋白

Note:ArrowsindieatinghteexPressedProteins.12圖2一5Fab蛋白復性的免疫印跡分析Fig.2一5RenaturationofFabProteinrenuaterdProducstofhteinelusionbodyrenuatredPorduesttreatedwithp一meerpatoehtnaol2.4Fab結合活性的檢測結果用ELsIA分別檢測培養(yǎng)上清、合活性(均以轉化pASK84的JM83可溶性部分及復性產物與HAV抗原的結相應部分為陰性對照)，結果表明在培養(yǎng)上清、可溶性蛋白及復性產物中均存在與HAV抗原特異結合的Fba抗體，且結合活性良好(圖2一6)。42

【參考文獻】：
期刊論文
[1]攜帶共擴增基因的CHO細胞表達載體的構建[J]. 劉國奇,陳小密,徐靜,宋宏彬,于長明,童貽剛,王海濤.  細胞與分子免疫學雜志. 2000(01)
[2]人噬菌體抗體庫的構建和甲肝抗體的篩選[J]. 杜桂鑫,于長明,毛春生,王海濤.  中華微生物學和免疫學雜志. 2000(01)
[3]人源抗HAV噬菌體抗體的篩選及基因序列分析[J]. 于長明,杜桂鑫,毛春生,宋宏彬,徐志凱,王海濤.  中華肝臟病雜志. 1999(03)
[4]抗結腸癌抗體Fab片段在大腸桿菌中的表達[J]. 李啟勝,俞煒源,王翔,袁枚,李力.  軍事醫(yī)學科學院院刊. 1999(01)
[5]人抗體組合文庫的構建和抗HBsAg噬菌體抗體的篩選[J]. 王學,王海濤,陳萬榮,徐靜.  生物化學與生物物理學報. 1997(02)



本文編號：2932177