抗體分子的研究及應(yīng)用一直是免疫學(xué)乃至整個生物學(xué)研究的熱點(diǎn)。在生物制品中，抗體類占了很大的份額，因此抗體工程的發(fā)展倍受人們的關(guān)注�？贵w技術(shù)由最初的血清多克隆抗體發(fā)展到雜交瘤單克隆抗體技術(shù)，直到目前的基因工程抗體技術(shù)，尤其是噬菌體抗體庫技術(shù)的出現(xiàn)，將抗體工程推到了一個新的發(fā)展階段。甲型肝炎病毒(HAV)是危害人類健康的重要致病原之一，目前已有多種用于接觸前預(yù)防的甲肝疫苗。但對于接觸后預(yù)防或短期到HAV高流行區(qū)的旅游者的預(yù)防，則多采用免疫球蛋白作被動免疫。血源性免疫球蛋白雖然效價(jià)高，應(yīng)用效果好，但可能被血源病原體污染，且浪費(fèi)血源。因此基因工程人源抗體有望成為接觸后預(yù)防的首選制劑。為此，我們用HAV的細(xì)胞培養(yǎng)抗原對已有的人源噬菌體抗體庫進(jìn)行篩選，獲得了與HAV抗原有結(jié)合活性的噬菌體抗體，并改建成Fab及全分子抗體，并用不同的表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行了表達(dá)。 一、人源抗HAV Fab基因的克隆及可溶性表達(dá) 用抗體捕獲的HAV抗原對噬菌體抗體庫進(jìn)行三輪淘篩，篩選出與HAV抗原有特異性結(jié)合能力的抗體，并對其重、輕鏈基因進(jìn)行了序列測定，分析表明重鏈Fd基因?qū)買gG1亞類，輕鏈基因?qū)佴蕘嗩�。在此基礎(chǔ)上構(gòu)... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

特異性噬菌體抗體競爭抑制性實(shí)驗(yàn)Fig.l一1ComPetitiveihnibitionELISAofPhgaenatibodies

誘導(dǎo)的細(xì)菌沒有表達(dá)較大量的外源可溶性蛋白。而在包涵體部分，在相對分子量約25Dk的位置上出現(xiàn)兩條帶，表明有重組蛋白表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物主要以包涵體的形式存在(圖2一4)。經(jīng)薄層掃描分析，重組蛋白占包涵體蛋白總量的39.1%。將包涵體經(jīng)變性復(fù)性后，經(jīng)免疫印跡檢測復(fù)性的可行性。按方法1.2.6，在透析過程中有大量的蛋白沉淀形成，但將透析后的產(chǎn)物離心取上清做免疫印跡時(shí)，未加還原劑的復(fù)性樣品僅在48Dk左右出現(xiàn)一特異條帶，而加還原劑后，在25Dk左右出現(xiàn)兩條帶(圖2一5)。該結(jié)果表明:雖然在復(fù)性過程中會損失很多蛋白

Note:ArrowsindieatinghteexPressedProteins.12圖2一5Fab蛋白復(fù)性的免疫印跡分析Fig.2一5RenaturationofFabProteinrenuaterdProducstofhteinelusionbodyrenuatredPorduesttreatedwithp一meerpatoehtnaol2.4Fab結(jié)合活性的檢測結(jié)果用ELsIA分別檢測培養(yǎng)上清、合活性(均以轉(zhuǎn)化pASK84的JM83可溶性部分及復(fù)性產(chǎn)物與HAV抗原的結(jié)相應(yīng)部分為陰性對照)，結(jié)果表明在培養(yǎng)上清、可溶性蛋白及復(fù)性產(chǎn)物中均存在與HAV抗原特異結(jié)合的Fba抗體，且結(jié)合活性良好(圖2一6)。42

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]攜帶共擴(kuò)增基因的CHO細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建[J]. 劉國奇,陳小密,徐靜,宋宏彬,于長明,童貽剛,王海濤.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2000(01)
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本文編號：2932177