組織損傷或神經(jīng)系統(tǒng)疾病嚴重影響著人類的生命健康和生活質(zhì)量，移植外源性干細胞修復受損部位或重塑神經(jīng)組織是目前治療這些疾病的主要策略，但神經(jīng)干細胞（neural stem cells, NSCs）或胚胎干細胞（embryonic stem cell, ESCs）由于來源和倫理等問題不能被廣泛應用于干細胞移植。間充質(zhì)干細胞（mesenchymalstem cells, MSCs）是一類多潛能成體干細胞，因其具有來源廣泛、體外增殖快和免疫原性弱等優(yōu)勢，迅速成為理想的組織工程種子細胞。體內(nèi)外實驗證實MSCs可以沿著趨化因子（HGF、VEGF、SDF）濃度梯度的方向向損傷部位遷移，修復受損的組織，但是關于細胞遷移的具體調(diào)控機制目前尚不清楚。Wnt/β-catenin信號通路不僅影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移，對干細胞的增殖、分化和遷移同樣具有重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)許多細胞因子如HGF、VEGF等可以激活Wnt/β-catenin信號通路，影響細胞的分化和遷移，此過程中沒有Wnt蛋白的參與。本文旨在研究肝細胞生長因子（HGF）誘導MSCs趨化性遷移過程中，Wnt/β-catenin信號通路的激活情況以及... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

HGF對MSCs中β-catenin表達水平的影響

（0 min、30 min、60 min、120 min、240 min），通過免疫熒光染色檢測 β-cate細胞中的定位情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn) HGF 處理 MSCs 30 min 時，胞質(zhì)中出現(xiàn)了 β-cate累積，處理 60 min，細胞核內(nèi) β-catenin 積累明顯，在處理的 240 min 內(nèi)，β-cate有明顯的出核或降解跡象（圖 1-2A）。TOPFlash 質(zhì)粒上含有螢火蟲熒光素酶報告基因，可以催化底物產(chǎn)生生物熒光螢火蟲熒光素酶基因的啟動子上游含有 TCF/LEF 的結(jié)合序列，因此受 β-cate性的調(diào)控。FOPFlash 與 TOPFlash 的基本序列一致，只是 FOPFlash 質(zhì)粒熒光啟動子上游的 TCF/LEF 結(jié)合序列是突變的，不能結(jié)合 TCF/LEF，因OPFlash/FOPFlash 常被用做指示細胞或組織中 Wnt/β-catenin 信號通路的激活。在本實驗中我們向 MSCs 轉(zhuǎn)染 TOPFlash/FOPFlash 質(zhì)粒，并同時共轉(zhuǎn)染海腎素酶報告基因 RL-TK，用螢火蟲熒光素值與海腎熒光素的比值（RLU）來指SCs 中 Wnt/β-catenin 信號的強度。通過檢測，我們發(fā)現(xiàn) 50 ng/ml HGF 使 MS TOPFlash 報告基因的 RLU 值增加了 4 倍，而 FOPFlash 報告基因沒有顯著變化中 LiCl 作為陽性對照（圖 1-2B）。

MSCs 向 HGF 的遷移過程。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn) HGF 誘導 MSCs 發(fā)生趨化性遷移，具有劑量依賴效應，最大誘導濃度為 50 ng/ml。在 Wnt/β-catenin 信號通路中，F(xiàn)H535 可以抑制 β-catenin 與 TCF/LEF 的結(jié)合，阻斷 Wnt 信號的傳導，因此被作為Wnt/β-catenin 信號通路的抑制劑。首先用不同濃度（0 μM、5 μM、10 μM、20 μM）的 FH535 預處理 MSCs 30 min，然后將處理的細胞加到 Boyden chamber 的上室，在下室加入 50 ng/ml HGF，并且上、下室同時加入相應濃度的 FH535，通過計數(shù)從上室遷移到膜下方的細胞數(shù)，研究 Wnt/β-catenin 信號通路對 MSCs 向 HGF 應答的影響。通過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，與 L-DMEM 處理組相比，50 ng/ml HGF 能夠明顯增加MSCs 的遷移，驗證了實驗室之前所得結(jié)果，但是 FH535 的處理顯著抑制了 MSCs向 HGF 的遷移，具有劑量依賴性，5 μM FH535 使細胞的遷移總數(shù)下降了 30%，而 20 μM FH535 使遷移下降超過了 50%（圖 1-3）。此外，為了檢測了 FH535 抑制MSCs 遷移的作用是否與細胞凋亡有關，我們用 50 ng/ml HGF 和不同濃度（0 μM、5 μM、10 μM、20 μM）的 FH535 處理 MSCs 4 h 后，發(fā)現(xiàn)細胞的數(shù)量沒有明顯變化，說明 FH535 抑制細胞遷移與細胞凋亡無關（結(jié)果未示）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Alterations of Lymphoid Enhancer Factor-1 Isoform Expression in Solid Tumors and Acute Leukemias[J]. Wenbing WANG Ping JI Bjrn STEFFEN Ralf METZGER Paul M.SCHNEIDER Hartmut HALFTER Mark SCHRADER Wolfgang E.BERDEL Hubert SERVE Carsten MLLER-TIDOW Institute of Life Sciences,Jiangsu University,Zhenjiang 212013.China;Hematology and Oncology.and Neurology,Department of Medicine,University of Mnster,D-48129 Mnster,Germany;Dematology of Visceral and Vascular Surgery,University of Cologne,D-50931 Cologne,Germany;Department of Urolooy,Free University Berlin,D-12200 Berlin..  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(03)
[2]Association of hTcf-4 gene expression and mutation with clinicopathological characteristics of hepatocellular carcinoma[J]. Ying Jiang Xin-Da Zhou Yin-Kun Liu Xin Wu Xiao-Wu Huang Liver Cancer Institute,Zhong Shah Hospital,Fudan University,Shanghai 200032,China.  World Journal of Gastroenterology. 2002(05)



本文編號：2926473