20-羥二十烷四烯酸（20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE）是由細(xì)胞色素P-450（CYP450）ω-羥化酶催化花生四烯酸生成的產(chǎn)物。研究認(rèn)為，20-HETE可通過激活L-型鈣通道并抑制鈣依賴鉀通道從而增強(qiáng)血管平滑肌的收縮，有效地調(diào)節(jié)腎、腦等小動(dòng)脈血管的緊張度，被認(rèn)為具有很強(qiáng)的收縮血管作用。20-HETE在血管平滑肌方面的研究已經(jīng)得到廣泛開展，但對(duì)心臟的作用及機(jī)制的研究少有報(bào)道。本文從如下幾個(gè)方面探究了20-HETE對(duì)心臟功能的影響以及機(jī)制：第一部分20-HETE對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道作用機(jī)制研究有研究表明，心肌缺血再灌注中20-HETE含量增加，抑制其生成可減少心肌損傷，但分子細(xì)胞機(jī)制尚不清楚。該部分研究的目的是在細(xì)胞水平揭示20-HETE對(duì)心肌的作用機(jī)制。首先，應(yīng)用膜片鉗技術(shù)研究了20-HETE對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道的作用，發(fā)現(xiàn)20-HETE濃度依賴式的增強(qiáng)L-型鈣電流，這種作用可被NADPH氧化酶特異性抑制劑gp91ds-tat或超氧化物歧化酶所抑制，提示NADPH氧化酶誘導(dǎo)生成的超氧化物參與了20-HETE激活L-型鈣通道的作用... 

【文章來源】：東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
    一、20-HETE在機(jī)體內(nèi)合成途徑及調(diào)節(jié)
    二、20-HETE的生理、病理作用及機(jī)制
        1. 20-HETE在調(diào)節(jié)血管緊張度中的作用及機(jī)制
        2. 20-HETE對(duì)腎臟功能的調(diào)節(jié)作用
        3. 20-HETE作為細(xì)胞內(nèi)第二信使及參與促細(xì)胞有絲分裂作用
        4. 20-HETE與NO之間的交互作用關(guān)系
        5. 20-HETE其他生理、病理作用
    三、20-HETE對(duì)心臟功能的影響及我實(shí)驗(yàn)室相關(guān)研究
        1. 20-HETE在心肌缺血再灌注損傷中的作用
        2. 本實(shí)驗(yàn)室相關(guān)研究
    四、本研究的背景、內(nèi)容及研究目標(biāo)
        1. 研究背景
        2 研究?jī)?nèi)容
        3 研究目標(biāo)
第一章 20-HETE對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道作用機(jī)制研究
    摘要
    一、引言
    二、材料與方法
        1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥品
        2. 成年大鼠心肌細(xì)胞分離
        3. 膜片鉗電生理記錄
        4. 心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測(cè)
        5. p47phox磷酸化水平檢測(cè)
        6. PKC活性檢測(cè)
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. 20-HETE通過激活心肌細(xì)胞膜L-型鈣通道增加ICa,L
        2. NADPH氧化酶及超氧化物介導(dǎo) 20-HETE增強(qiáng)L-型鈣電流作用
        3. 20-HETE增加了心肌細(xì)胞中ROS的生成
        4. 20-HETE增強(qiáng)了心肌細(xì)胞中NADPH氧化酶活性
        5. PKC參與 20-HETE 激活NADPH氧化酶引起超氧化物的生成作用
        6. 20-HETE增加PKC活性及NADPH氧化酶的磷酸化水平
        7. 20-HETE通過PKC依賴性機(jī)制增加心肌細(xì)胞L-型鈣電流作用
    四、討論
第二章 20-HETE在心肌缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制研究
    摘要
    一、引言
    二、材料與方法
        1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥品
        2. 大鼠離體心肌缺血再灌注模型建立
        2. 缺血再灌注實(shí)驗(yàn)方案
        3. 心梗面積測(cè)定
        4. 心肌細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        5. 心肌ROS水平測(cè)定
        6. 蛋白質(zhì)過氧化水平檢測(cè)
        7. qRT-PCR方法檢測(cè)p22phox和gp91phoxmRNA表達(dá)
        8. Western Blot檢測(cè)p22phox和gp91phox蛋白表達(dá)
        9. NADPH氧化酶活性檢測(cè)
        10. 心肌組織過氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性檢測(cè)
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. HET0016 減弱了 20-HETE誘導(dǎo)的加重缺血再灌注后心肌功能的下降
        2. HET0016 抑制了 20-HETE誘導(dǎo)的缺血再灌注后心肌梗死面積增加
        3. HET0016 抑制了 20-HETE誘導(dǎo)的缺血再灌注后心肌細(xì)胞凋亡作用
        4. HET0016 和 20-HETE對(duì)缺血再灌注誘發(fā)ROS生成及蛋白質(zhì)過氧化的影響
        5. HET0016 和 20-HETE對(duì)缺血再灌注后心肌組織SOD和catalase活性的影響
        6. 20-HETE增加了再灌注后NADPH氧化酶亞基的表達(dá)和活性增強(qiáng)
        7. 20-HETE通過PKC依賴機(jī)制激活NADPH氧化酶
        8. Apocynin和Tempol減弱了 20-HETE誘導(dǎo)的缺血再灌注后心肌功能的下降
    四、討論
第三章 20-HETE介導(dǎo)血管緊張素II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡研究
    摘要
    一、引言
    二、材料與方法
        1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥品
        2. 原代乳鼠心肌細(xì)胞分離及培養(yǎng)
        3. FITC-annexin V與PI雙染法測(cè)定心肌細(xì)胞凋亡
        4. 高效液相色譜分析檢測(cè) 20-HETE含量
        5. 心肌細(xì)胞線粒體膜電位（ΔΨm）檢測(cè)
        6. 心肌細(xì)胞中ROS含量測(cè)定
        7. Real-time RT-PCR方法檢測(cè)CYP4A1mRNA和蛋白表達(dá)
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. Ang II促進(jìn)培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡
        2. Ang II增加心肌細(xì)胞內(nèi) 20-HETE生成
        3. HTE0016 對(duì)Ang II誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用
        4. HET0016 抑制Ang II和 20-HETE誘導(dǎo)的線粒體膜電位下降
        5. HET0016 抑制Ang II和 20-HETE誘導(dǎo)的ROS過量生成
        6. Ang II促進(jìn)心肌細(xì)胞內(nèi)CYP4A1 表達(dá)
    四、討論
第四章 20-HETE通過δPKC對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道和全細(xì)胞鉀通道電流及心肌力學(xué)的作用研究
    摘要
    一、引言
    二、材料與方法
        1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥品
        2. 大鼠離體心肌力學(xué)測(cè)定
        3. 成年大鼠心肌細(xì)胞分離
        4. 膜片鉗電生理記錄
        5. 統(tǒng)計(jì)方法
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. δPKC抑制劑卡馬拉素阻斷了 20-HETE誘導(dǎo)的L-型鈣通道電流增強(qiáng)作用
        2. 卡馬拉素阻斷了 20-HETE對(duì)全細(xì)胞鉀通道電流的抑制作用
        3. 卡馬拉素阻斷了 20-HETE誘導(dǎo)的心肌力學(xué)指標(biāo)的下降
    四、討論
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在學(xué)期間公開發(fā)表論文及著作情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]20-羥二十烷四烯酸在機(jī)體生理及病理調(diào)節(jié)中的作用[J]. 張迪,霍洪亮,張英妮,曾慶華.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2007(02)



本文編號(hào)：2923809