CTLA-4（cytotoxic T lymphocyte-associated protein or antige-4，毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白-4）是免疫球蛋白超家族成員之一。主要存在于激活的T細(xì)胞表面，多以二聚體形式存在，部分以單體形式存在。CTLA-4二聚體與B7具有高親和力的受體—配基結(jié)合活性，結(jié)合力較CD28大150倍，是T細(xì)胞激活雙信號(hào)模型中與CD28／B7共同發(fā)揮作用的重要的共刺激信號(hào)之一，目前被認(rèn)為是一種天然免疫下調(diào)物質(zhì)。在多種小鼠模型中已經(jīng)證明阻斷CD28／B7分子的共刺激信號(hào)，可抑制體液免疫、移植排斥、緩解自身免疫性疾病、阻斷多種免疫反應(yīng)。研究顯示CTLA-4胞外片段與轉(zhuǎn)染B7分子的CHO細(xì)胞能特異性結(jié)合、體外實(shí)驗(yàn)表明能與細(xì)胞表面B7形成免疫共沉淀、CTLA-4Ig對(duì)動(dòng)物器官移植具有免疫抑制效應(yīng)，上述結(jié)果為該片段用于臨床治療提供了有力證據(jù)。 我們通過PCR擴(kuò)增獲得CTLA-4cDNA片段。以含CTLA-4基因的質(zhì)粒pE為模板，分別設(shè)計(jì)了能與鏈霉菌表達(dá)質(zhì)粒及大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒相匹配的引物，采用PCR方法擴(kuò)增得到相應(yīng)的CTLA-4片段，序列分析證明結(jié)果正確。 ... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增CTLA一4和vsi結(jié)果

圖4重組質(zhì)粒pCV酶切鑒定esrtietionenZymaticnaa】ysisofhteereombninatPd2.四C18川as面d3.PCV舊amHI+EcoRI.4PC乃湯al+EeoRI6M田爪erP7CV尼eoRJ8.UPC1啟動(dòng)子前230bp的vsi一CTLA一4的融合C12的構(gòu)建SC(包含vsi雙啟動(dòng)子前230bp及s+/一質(zhì)粒，由比利時(shí)魯文大學(xué)Anne’教酶補(bǔ)平，環(huán)ndm酶切后可作為外源基PS一P6為引物，pcT為模板，PCR擴(kuò)Eoc租酶切，Klneow酶補(bǔ)平，Hindm酶接處如圖所示。CAGGCC*G森G*GCCAATTCTGCAA的重組質(zhì)粒命名為pBSC12，酶切分析經(jīng)Drall汗五ndlll雙酶切可得到454bp和

預(yù)期連接處如圖所示。ACCGCGCAGGCC*G森G*GCCAATTCTGCAAl，GCACGTG由此得到的重組質(zhì)粒命名為pBSC12，酶切分析結(jié)果如圖5所示。原質(zhì)粒pBSC經(jīng)Drall汗五ndlll雙酶切可得到454bp和3500bp片段，


本文編號(hào)：2923599