目的:利用大腸桿菌表達(dá)可溶性hCTRP1球狀功能區(qū)蛋白并分析其生物活性。方法:重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21-codonplus（DE3）菌株、IPTG（異丙基-β-D-硫代半乳糖苷）誘導(dǎo)表達(dá)并純化。結(jié)果:hCTRP1球狀區(qū)蛋白實(shí)現(xiàn)在大腸桿菌中的高水平表達(dá),利用鎳親合純化和分子篩純化到重組蛋白,重組蛋白在細(xì)胞和動(dòng)物水平上都具有生物活性。結(jié)論:利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)高效制備了具有生物活性的hCTRP1球狀功能區(qū)蛋白。 

【文章來源】：中國醫(yī)院藥學(xué)雜志. 2015年03期 北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

圖１重組可溶性蛋白Ｔｒｘ－ｇＨ１的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析Ｍ：蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)；１－３：經(jīng)ＩＰＴＧ誘導(dǎo)的３個(gè)轉(zhuǎn)化子菌體可溶性蛋白；４：未經(jīng)ＩＰＴＧ誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)化子菌體可溶性蛋

蛋白的純度最高（圖２－Ａ所示）。純化結(jié)果說明，利用鎳親合層析可以對Ｔｒｘ－ｇＨ１蛋白有效純化。將３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１咪唑洗脫的蛋白樣品收集，利用曲拉通Ｘ－１１４除去內(nèi)毒素后ＰＢＳ（磷酸鹽緩沖液）透析并超濾濃縮，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５分子篩對重組蛋白進(jìn)一步純化，純化蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ結(jié)果如圖２－Ｂ所示，從圖２－Ｂ可看出，２０μｇ蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ結(jié)果中看不到雜蛋白條帶，說明經(jīng)分子篩純化后蛋白樣品的純度可以用于活性測試實(shí)驗(yàn)。圖２重組蛋白Ｔｒｘ－ｇＨ１的純化Ａ．鎳親合層析純化重組蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；Ｂ．分子篩純化Ｔｒｘ－ｇＨ１蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；Ｍ：蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)；１：經(jīng)分子篩純化的蛋白Ｆｉｇ２ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｏｆＴｒｘ－ｇＨ１Ａ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｒｘ－ｇＨ１ｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙＮｉ－ＮＴＡａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；Ｂ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｕｒｉｆｉｅｄＴｒｘ－ｇＨ１ｆｒｏｍＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５ｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎ；Ｍ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔａｎｄａｒｄｏｆｐｒｏ－ｔｅｉｎ；１：ｐｒｏｔｅｉｎｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ３．３活性分析為確定表達(dá)純化的Ｔｒｘ－ｇＨ１是否具有生物活性，表達(dá)產(chǎn)物刺激分化Ｃ２Ｃ１２細(xì)胞。ＷＢ結(jié)果表明，Ｔｒｘ－ｇＨ１可以特異激活Ａｋｔ磷酸化，而Ｔｒｘ蛋白不能激活Ａｋｔ信號通

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Characterization of the Expression of CTRP9, a Paralog of Adiponectin[J]. 黃子紋,崔婷,劉晶,莊源,孟慶航,陶李濤,李珍.  Tsinghua Science and Technology. 2008(04)



本文編號：2922526