目的:研究登革Ⅱ型病毒（DENV-2）感染人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）和人巨噬細胞,且感染后共培養(yǎng)對主要黏附分子表達的影響。方法:水平密度梯度離心法提取濃縮白細胞中的外周血單核細胞（PBMC）,貼壁分離單核細胞,用巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）刺激5～7 d,流式細胞術鑒定細胞表面CD14和CD11b分子。用10³ TCID50 DENV-2分別感染HUVECs和人巨噬細胞,且感染后兩者共培養(yǎng),qRT-PCR檢測細胞內不同時間點DENV NS1、VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA相對表達量。雙抗體夾心ELISA法分別檢測不同時間點各組培養(yǎng)上清液中可溶性分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表達水平變化。結果:流式細胞術鑒定人巨噬細胞純度為（92.15±1.24）%。DENV-2感染HUVECs后病毒基因NS1的相對表達量呈先升后降趨勢,在24 h達到峰值后下降,DENV-2感染人巨噬細胞的DENV NS1基因相對表達量呈先遞減后增加趨勢,共培養(yǎng)組HUVECs的NS1 mRNA各時間點表達水平均高于HUVECs單獨感染... 

【文章來源】：中國免疫學雜志. 2019年15期 第1802-1807頁 北大核心

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【部分圖文】：

DENV-2部分序列擴增Fig．1PartialsequenceamplificationofNS1

經刺激因子衍生為巨噬細胞，經流式細胞儀鑒定純度為(92.15±1.24)%(圖2)。2.3qRT-PCR檢測不同時間點HUVECs和巨噬細胞及共培養(yǎng)后HUVECs中病毒載量DENV-2感染HUVECs后，NS1mRNA相對表達量呈先增加后降低趨勢(圖3A)，24h(1.25±0.16)達峰值且比4h感染組增加了(1.44±0.17)倍(P＜0.05)。DENV-2感染巨噬細胞后，NS1mRNA相對表達量呈先遞減后增加趨勢(圖3B)。感染的HUVECs與感染的巨噬細胞共培養(yǎng)，其HUVECs的NS1mRNA相對表達量均高于相應時間點HUVECs單獨感染組，在24h(19.78±2.63，P＜0.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)顯著上調(圖4)。2.4qRT-PCR檢測不同時間點DENV-2感染的巨噬細胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相對表達量DENV-2感染巨噬細胞后，ICAM-1mRNA相對表達量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬細胞未感染組，圖2流式細胞術檢測M-CSF刺激后巨噬細胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.圖3NS1mRNA不同時間點相對表達量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)?

.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)顯著上調(圖4)。2.4qRT-PCR檢測不同時間點DENV-2感染的巨噬細胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相對表達量DENV-2感染巨噬細胞后，ICAM-1mRNA相對表達量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬細胞未感染組，圖2流式細胞術檢測M-CSF刺激后巨噬細胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.圖3NS1mRNA不同時間點相對表達量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)、48h(0.97±0.04)、72h(0.84±0.06)相對表達水平與未感染組相比差異無統(tǒng)計學意義(圖5A)，E-selectinmRNA相對表達量于4h(5.65±1.51，P＜0.0001)明顯高于未感染組，8h(1.45±0.21)與未感染組相比表達量相比差異無統(tǒng)計學意義，12h(0.15±0.03)、24h(0.14±0.04)、48h(0.19±0.06)、72h(0.24±0.09)與未感染組相比表達量下調(圖5B)，但未檢測到VCAM-1mRNA的表達。2.5qRT-PCR檢測不同時間點HUVECs中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相對表達量DENV-2感染HUVECs后，各時間點ICAM-1?


本文編號：2909112