發(fā)布時(shí)間：2020-12-10 17:46

　　目的:研究登革Ⅱ型病毒（DENV-2）感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）和人巨噬細(xì)胞,且感染后共培養(yǎng)對(duì)主要黏附分子表達(dá)的影響。方法:水平密度梯度離心法提取濃縮白細(xì)胞中的外周血單核細(xì)胞（PBMC）,貼壁分離單核細(xì)胞,用巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）刺激5～7 d,流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面CD14和CD11b分子。用10³ TCID50 DENV-2分別感染HUVECs和人巨噬細(xì)胞,且感染后兩者共培養(yǎng),qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)DENV NS1、VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA相對(duì)表達(dá)量。雙抗體夾心ELISA法分別檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)各組培養(yǎng)上清液中可溶性分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表達(dá)水平變化。結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)鑒定人巨噬細(xì)胞純度為（92.15±1.24）%。DENV-2感染HUVECs后病毒基因NS1的相對(duì)表達(dá)量呈先升后降趨勢(shì),在24 h達(dá)到峰值后下降,DENV-2感染人巨噬細(xì)胞的DENV NS1基因相對(duì)表達(dá)量呈先遞減后增加趨勢(shì),共培養(yǎng)組HUVECs的NS1 mRNA各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)水平均高于HUVECs單獨(dú)感染... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2019年15期 第1802-1807頁(yè) 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

DENV-2部分序列擴(kuò)增Fig．1PartialsequenceamplificationofNS1

經(jīng)刺激因子衍生為巨噬細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定純度為(92.15±1.24)%(圖2)。2.3qRT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)HUVECs和巨噬細(xì)胞及共培養(yǎng)后HUVECs中病毒載量DENV-2感染HUVECs后，NS1mRNA相對(duì)表達(dá)量呈先增加后降低趨勢(shì)(圖3A)，24h(1.25±0.16)達(dá)峰值且比4h感染組增加了(1.44±0.17)倍(P＜0.05)。DENV-2感染巨噬細(xì)胞后，NS1mRNA相對(duì)表達(dá)量呈先遞減后增加趨勢(shì)(圖3B)。感染的HUVECs與感染的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，其HUVECs的NS1mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)HUVECs單獨(dú)感染組，在24h(19.78±2.63，P＜0.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)顯著上調(diào)(圖4)。2.4qRT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)DENV-2感染的巨噬細(xì)胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相對(duì)表達(dá)量DENV-2感染巨噬細(xì)胞后，ICAM-1mRNA相對(duì)表達(dá)量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬細(xì)胞未感染組，圖2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M-CSF刺激后巨噬細(xì)胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.圖3NS1mRNA不同時(shí)間點(diǎn)相對(duì)表達(dá)量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)?

.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)顯著上調(diào)(圖4)。2.4qRT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)DENV-2感染的巨噬細(xì)胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相對(duì)表達(dá)量DENV-2感染巨噬細(xì)胞后，ICAM-1mRNA相對(duì)表達(dá)量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬細(xì)胞未感染組，圖2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M-CSF刺激后巨噬細(xì)胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.圖3NS1mRNA不同時(shí)間點(diǎn)相對(duì)表達(dá)量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)、48h(0.97±0.04)、72h(0.84±0.06)相對(duì)表達(dá)水平與未感染組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖5A)，E-selectinmRNA相對(duì)表達(dá)量于4h(5.65±1.51，P＜0.0001)明顯高于未感染組，8h(1.45±0.21)與未感染組相比表達(dá)量相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，12h(0.15±0.03)、24h(0.14±0.04)、48h(0.19±0.06)、72h(0.24±0.09)與未感染組相比表達(dá)量下調(diào)(圖5B)，但未檢測(cè)到VCAM-1mRNA的表達(dá)。2.5qRT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)HUVECs中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相對(duì)表達(dá)量DENV-2感染HUVECs后，各時(shí)間點(diǎn)ICAM-1?


本文編號(hào)：2909112