目的 研究粘附分子 PECAM-1、ICAM-3、VCAM-1 和 CD44 在組織淋巴管 內(nèi)皮和培養(yǎng) LECs 的表達(dá),通過建立體外三維淋巴管形成模型,研究內(nèi)皮粘附分 子在 LECs 增殖、遷移和管樣結(jié)構(gòu)形成中的作用。方法 取狗的空腸和腹前壁皮 膚,作冰凍切片,用免疫組織化學(xué)染色法標(biāo)記粘附分子在組織淋巴管內(nèi)皮的表達(dá)。 分離和培養(yǎng)狗胸導(dǎo)管的 LECs,用免疫熒光染色法標(biāo)記粘附分子在 LECs 的表達(dá), 在共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察。用圖像分析系統(tǒng)分析粘附分子表達(dá)的 OD 值, 并與 TNF-α或 LPS 刺激細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)行比較。內(nèi)皮細(xì)胞用 TNF-α或 LPS 刺激后, 分別阻斷 PECAM-1、ICAM-3 和 CD44,計(jì)數(shù)細(xì)胞增殖數(shù)目和計(jì)算細(xì)胞遷移率。 制備體外三維Ⅰ型膠原蛋白凝膠淋巴管形成模型,阻斷 PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 后,觀察管樣結(jié)構(gòu)的形成,測量管樣結(jié)構(gòu)的長度和面積,并在透射電鏡下 觀察其特征。 結(jié)果 小腸和皮膚內(nèi)的淋巴管內(nèi)皮 PECAM-1 和 ICAM-3 呈免疫 反應(yīng)陽性。培養(yǎng)的 LECs 表達(dá) PECAM-1、ICAM-3 和 CD44,不表達(dá) VCAM-1。 用 TNF-α刺激 LECs 后,PECAM-1 和 ICAM-3 表達(dá)的 OD 值與正常對照組無明 顯差別,CD44 的 OD 值低于正常對照組。用 LPS 刺激細(xì)胞后,PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 表達(dá)的 OD 值均無顯著性變化。用 TNF-α或 LPS 刺激細(xì)胞后,VCAM-1 呈弱表達(dá)。在對照組以及 TNF-α和 LPS 刺激組,阻斷 PECAM-1 或 CD44 后,細(xì) 胞的增殖數(shù)目降低,但阻斷 ICAM-3 后細(xì)胞的增殖數(shù)目無明顯變化。分別阻斷 PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 后,內(nèi)皮細(xì)胞的遷移率降低,管樣結(jié)構(gòu)的長度和面 積減少。在半薄和超薄切片上,LECs 形成的管狀結(jié)構(gòu)具有毛細(xì)淋巴管的形態(tài)特 征。結(jié)論 粘附分子 PECAM-1、ICAM-3、CD44 和 VCAM-1 在組織內(nèi)淋巴管內(nèi) 皮和培養(yǎng) LECs 的表達(dá)不一致。用 TNF-α或 LPS 刺激后,培養(yǎng) LECs 不同粘附分 子的表達(dá)變化也不相同。PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 參與了體外 LECs 的增殖、 遷移和管腔形成等淋巴管新生過程。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R329
【部分圖文】：

15圖 1 PECAM-1 和 ICAM-3 在狗小腸和皮膚淋巴管內(nèi)皮的表達(dá)。小腸絨毛縱斷面（1A）和橫斷面（1B）中央乳糜管的內(nèi)皮以及皮膚的淋巴管內(nèi)皮（1E）均呈 PECAM-1 免疫反應(yīng)陽性。中央乳糜管的內(nèi)皮（1C）和皮膚的淋巴管內(nèi)皮（1F）也呈 ICAM-3 免疫反應(yīng)陽性。在標(biāo)記 ICAM-3（1C）的連續(xù)切片上，淋巴管內(nèi)皮也表達(dá) VEGFR-3（1D）�！� 示淋巴管內(nèi)皮。ABC 染色。1A × 100，1B ~ 1F × 200

16圖 2 胸導(dǎo)管內(nèi)皮細(xì)胞的相差倒置顯微鏡照片。原代培養(yǎng) 24 h 后，細(xì)胞呈簇分布（2A）細(xì)胞形成單層時(shí)呈特征性的卵石狀形態(tài)（2B）。 2A× 400，2B × 100

17圖 3 培養(yǎng) LECs 的Ⅷ因子相關(guān)抗原和 VEGFR-3 的表達(dá)。細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮的特異性因子相關(guān)抗原（3A）和淋巴管內(nèi)皮的特異性標(biāo)記物 VEGFR-3（3B）。免疫熒光染色
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本文編號：2891846