本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細胞來源的造血干細胞向CIK細胞的誘導分化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： （1）改良體外分離培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細胞和臍帶間充質(zhì)干細胞的方法，比較兩種來源間充質(zhì)干細胞的成長特性； （2）探索多種細胞因子聯(lián)合誘導下，脂肪間充質(zhì)干細胞來源的造血干細胞（ADMSC-HSCs）能否分化為同時表達CD3+CD56+的淋巴系免疫細胞，即CIK細胞。 方法： （1）采用改良酶消化法分離提取人脂肪和臍帶標本中的間充質(zhì)干細胞.通過貼壁培養(yǎng)純化細胞，記錄原代間充質(zhì)細胞生長情況；使用倒置顯微鏡和吉姆薩染色觀察原代和傳代后兩種細胞形態(tài)差別；通過MTT法繪制生長曲線比較兩種細胞的增殖速率；使用流式細胞儀檢測兩種來源的間充質(zhì)干細胞的特征表面分子。 （2）取第三代脂肪間充質(zhì)干細胞，利用經(jīng)由細胞穿透肽轉(zhuǎn)染shRNA（shRNA-337）并加入特定成分培養(yǎng)基誘導其定向分化，培養(yǎng)5天后，經(jīng)流式細胞儀檢測誘導細胞的造血干細胞特征性表面分子CD34、CD38、CD45表達情況。并收獲脂肪間充質(zhì)細胞來源的造血干細胞（ADMSC-HSCs）加入CIK誘導體系繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)7天、14天分別后檢測CIK細胞表面標志分子CD3、CD56表達情況。 結(jié)果： （1）經(jīng)改良酶消化法均能成功獲得的人脂肪間充質(zhì)干細胞和臍帶間充質(zhì)干細胞，脂肪充質(zhì)干細胞的原代細胞增殖速度較快。兩種間充質(zhì)干細胞均呈典型的短梭形、漩渦樣貼壁生長，臍帶間充質(zhì)干細胞體積較大。通過分析生長曲線，臍帶間充質(zhì)細胞的倍增速度略快于脂肪間充質(zhì)干細胞。兩種間充質(zhì)干細胞均表達CD29、CD44、CD90、CD166間充干細胞特征表面分子，不表達CD34、CD45、CD49f、CD133。 （2）脂肪間充質(zhì)干細胞經(jīng)細胞穿透肽轉(zhuǎn)染shRNA-337后，誘導培養(yǎng)5天，細胞形態(tài)和分子表型均發(fā)生改變，ADMSC-HSCs呈集落樣懸浮生長，產(chǎn)生CD34，CD38，CD45造血干細胞表面標志物；收獲后的ADMSC-HSCs經(jīng)CIK細胞誘導培養(yǎng)體系培養(yǎng)后14天出現(xiàn)CD3，CD56高陽性表達，CIK效應細胞CD3+CD56+細胞比率可達(25.12±1.38)%。 結(jié)論： （1）改良酶消化法能成功分離脂肪間充質(zhì)干細胞和臍帶間充質(zhì)干細胞，脂肪間充質(zhì)干細胞倍增速度略慢于臍帶間充質(zhì)細胞，，但二者表達的干性表面標志一致。 （2）脂肪間充質(zhì)干細胞來源的的造血干細胞（hADMSC-HSCs）有誘導分化為CIK細胞的能力。
【關(guān)鍵詞】：shRNA-337 轉(zhuǎn)染 間充質(zhì)干細胞 造血干細胞 CIK細胞
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-14
• 1.1 間充質(zhì)干細胞特性和研究進展10-11
• 1.2 惡性腫瘤的發(fā)生現(xiàn)狀和細胞免疫治療11-13
• 1.3 小 RNA 與干細胞分化調(diào)控13-14
• 第2章 材料與方法14-26
• 2.1 實驗儀器、材料與試劑14-17
• 2.1.1 實驗儀器14-15
• 2.1.2 實驗材料15
• 2.1.3 實驗試劑15-16
• 2.1.4 實驗試劑配置16-17
• 2.2 實驗方法17-25
• 2.2.1 間充質(zhì)干細胞原代細胞提取17-18
• 2.2.2 間充質(zhì)干細胞細胞培養(yǎng)18-19
• 2.2.3 間充質(zhì)干細胞吉姆薩染色19
• 2.2.4 MTT 法測定細胞生長曲線19-20
• 2.2.5 間充質(zhì)干細胞表面分子標志物檢測20-21
• 2.2.6 多勝肽 GenoFect 細胞轉(zhuǎn)染效率測定21-22
• 2.2.7 ADMSC-HSCs 誘導分化22-23
• 2.2.8 ADMSC-HSCs 細胞特征表面分子鑒定23
• 2.2.9 CIK 細胞的誘導分化23-24
• 2.2.10 CIK 細胞特征表面分子鑒定24-25
• 2.3 統(tǒng)計方法25-26
• 第3章 結(jié)果26-37
• 3.1 ADMSCs 和 UCMSCs 生長特性26-28
• 3.2 ADMSCs 和 UCMSCs 體外增殖特點28
• 3.3 ADMSCs 和 UCMSCs 的細胞免疫表型28-30
• 3.4 多勝肽 GenoFect 細胞轉(zhuǎn)染效率30-32
• 3.5 ADMSC-HSCs 形態(tài)特征32-33
• 3.6 ADMSC-HSCs 細胞特征表面分子鑒定33
• 3.7 CIK 細胞形態(tài)特征33-34
• 3.8 CIK 細胞特征表面分子鑒定34-37
• 第4章 討論37-41
• 4.1 兩種間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)與臨床應用前景37-38
• 4.2 間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)分化為造血干細胞理論基礎(chǔ)38-39
• 4.3 ADMSC-HSCs 來源的 CIK 細胞39-41
• 第5章 結(jié)論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻43-46
• 攻讀學位期間的研究成果46-47
• 綜述47-53
• 參考文獻51-53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王其京;王慧;潘科;;自體CIK、DC-CIK與半合子DC-CIK抗腫瘤免疫反應的比較研究(英文)[J];癌癥;2010年07期

2 ;Autologous cytokine-induced killer cell therapy in clinical trial phase I is safe in patients with primary hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年08期

  本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細胞來源的造血干細胞向CIK細胞的誘導分化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：288262