目的探究shRNA(short hairpin RNA)干擾Nod樣受體蛋白(NLRP3)對(duì)新生大鼠腦缺血再灌注模型(MCAO)的心肌損傷和免疫反應(yīng)的作用及機(jī)制。方法構(gòu)建新生大鼠MCAO,實(shí)驗(yàn)分4組:假手術(shù)組、模型組(MCAO組)、MCAO+陰性對(duì)照組和MCAO+sh-NLRP3組,每組10只。采用RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Western blot)檢測(cè)NLRP3表達(dá);HE染色觀察心肌組織病理學(xué)改變;免疫組化檢測(cè)Ki67表達(dá);Western blot檢測(cè)Ki67和PCNA表達(dá);TUNEL染色檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率;Western blot檢測(cè)心肌細(xì)胞Caspase-3、Caspase-9表達(dá);Elisa檢測(cè)Mb、CK-MB和cTnⅠ含量及心肌炎標(biāo)記分子IL-1β、iNOS、IL-6表達(dá);Western blot檢測(cè)TGF-β1、NF-κB p65和TNF-α表達(dá)。結(jié)果sh-NLRP3能抑制模型大鼠NLRP3在基因和蛋白水平上的表達(dá)(P0.01),改善心肌壞死,上調(diào)心肌組織中Ki67和PCNA表達(dá)(P0.01),降低心肌細(xì)胞凋亡率(P0.01)和Caspase-3、Caspase-9的蛋白表達(dá)(P0.01),降低大鼠血清中Mb、cTnⅠ和CK-MB的含量(P0.01),同時(shí)下調(diào)TGF-β1、P-P65/P65和TNF-α的蛋白表達(dá)。結(jié)論sh-NLRP3對(duì)MCAO新生大鼠的心肌損傷和免疫反應(yīng)起保護(hù)作用,其機(jī)制與抑制TGF-β1/NF-κB p65/TNF-α炎癥通路活化相關(guān)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 試劑與儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 制備動(dòng)物模型
        1.3.2 分組給藥
        1.3.3 RT-PCR
        1.3.4 蛋白質(zhì)印跡技術(shù)（Wertern blot）
        1.3.5 HE染色
        1.3.6 免疫組織化學(xué)
        1.3.7 TUNEL染色
        1.3.8 Elisa
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 sh-NLRP3對(duì)4組大鼠心肌組織中NLRP3表達(dá)的干擾作用
    2.2 sh-NLRP3對(duì)4組大鼠心肌病理損傷的比較
    2.3 sh-NLRP3對(duì)4組大鼠心肌組織Ki67、PCNA表達(dá)的影響
    2.4 sh-NLRP3對(duì)4組大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響
    2.5 sh-NLRP3對(duì)4組大鼠心肌損傷標(biāo)記物含量的影響
    2.6 sh-NLRP3對(duì)4組大鼠TGF-β1、P-NF-κB p65和下游TNF-α表達(dá)的影響
    2.7 sh-NLRP3對(duì)4組大鼠心肌炎標(biāo)記分子表達(dá)的影響
3 討論

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2863209