本文關鍵詞：帕金森病腦片模型的建立及多巴胺醌的毒性作用及清除途徑研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：建立離體腦片的培養(yǎng)體系與研究系統(tǒng),在腦片水平上建立帕金森病模型。研究多巴胺和左旋多巴對于中腦離體腦片多巴胺能細胞的毒性作用及其機制,以及醌氧化還原酶(Quinone oxidoreductase, NQO1)對于多巴胺細胞損傷的保護效應,從而進一步探究帕金森病的發(fā)病機制以及治療措施。 方法：建立并評價離體腦片模型,通過免疫熒光、蛋白質印跡(Western Blot)檢測目標蛋白多巴胺能細胞的特異性蛋白(Tyrosine hydroxylase,TH)的表達,運用氯化硝基四氮唑藍NBT/甘氨酸法等實驗技術,檢測醌化蛋白的含量變化,從而鑒定不同濃度多巴胺對黑質腦片多巴胺能細胞的毒性作用及其與醌蛋白形成的相關性；通過將囊泡單胺類轉運體(Vesicular monamine transporter2,VMAT2)進行拮抗,探究多巴胺的毒性損傷與胞質內游離多巴胺的相關性。運用離體腦片模型,研究左旋多巴對于多巴胺神經元和5-羥色胺神經元的毒性效應。通過運用小分子Ⅱ相酶誘導劑蘿卜硫素(Sulforaphane, SF)誘導體內醌氧化還原酶NQO1的表達,檢測探究誘導劑對于多巴胺造成的細胞毒性的預防作用。 結果：成功建立了離體腦片培養(yǎng)體系及基于多巴胺醌蛋白病因機制的帕金森病腦片模型。當培養(yǎng)體系多巴胺濃度達到600μM,中腦腦片多巴胺能神經元活性顯著降低,且同時細胞內醌蛋白含量隨多巴胺濃度上升而增加。將VMAT2拮抗后,多巴胺細胞存活率進一步降低,同樣伴隨醌蛋白含量升高。經1μM濃度SF誘導NQO1后,能有效拮抗多巴胺的毒性效應,細胞活性顯著提高且醌蛋白含量減少。運用左旋多巴后可導致中腦多巴胺細胞以及中縫核5-羥色胺細胞存活率下降,在濃度為600μM時有顯著差異,并與左旋多巴濃度負相關,拮抗VMAT2后進一步增加細胞的損傷。 結論：在腦片模型上,實驗結果顯示不同濃度多巴胺對于黑質多巴胺能細胞的毒性損傷與醌蛋白形成有關,提示帕金森病病因可能與多巴胺自身代謝過程中醌和醌蛋白的產生有關。另外,驗證了帕金森病運用左旋多巴治療過程中產生的并發(fā)癥可能同樣與多巴醌及其醌蛋白相關,且左旋多巴的這種毒性效應累及到多巴胺神經元和5-羥色胺神經元。在腦片水平驗證了高表達醌氧化還原酶NQO1對多巴胺引起的細胞毒性作用具有一定的保護效應。這為帕金森病的預防和治療措施的進一步研究具有參考價值。
【關鍵詞】：腦片模型 帕金森病 多巴胺醌蛋白毒性 Ⅱ相酶誘導劑保護效應
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R742.5
【目錄】：

• 論文摘要6-8
• Abstract8-11
• 綜述11-16
• 第一章.建立離體腦片的培養(yǎng)體系與研究系統(tǒng)16-25
• 前言16-17
• 1 材料與方法17-21
• 1.1 實驗材料17-19
• 1.2 實驗方法19-21
• 2 結果21-24
• 2.1 免疫焚光法檢測FBS培養(yǎng)下離體中腦腦片TH陽性細胞21
• 2.2 免疫焚光法檢測HS+5m/mL葡萄糖培養(yǎng)下離體中腦腦片TH陽性細胞21-22
• 2.3 免疫焚光法檢測HS+6.5ing/mL葡萄糖培養(yǎng)下離體中腦腦片TH陽性細胞22-23
• 2.4 FBS與HS培養(yǎng)條件下的離體腦片邊緣23-24
• 3 討論24-25
• 第二章.DA對離體腦片多巴胺能細胞的損傷作用25-37
• 前言25
• 1 材料與方法25-29
• 1.1 實驗材料25-27
• 1.2 實驗方法27-29
• 2 結果29-35
• 2.1 DA對離體腦片多巴胺細胞的毒性影響29-32
• 2.2 RS拮抗VMTA2對于離體腦片的損傷32-34
• 2.3 離體中腦腦片醌蛋白檢測34-35
• 3 討論35-37
• 第三章.SF對于離體腦片DA毒性的保護作用37-47
• 前言37
• 1 材料與方法37-42
• 1.1 實驗材料37-39
• 1.2 實驗方法39-42
• 2 結果42-45
• 2.1 SF預處理對離體腦片中NQO1的誘導42-43
• 2.2 SF預處理后對離體腦片多巴胺能細胞DA損傷的影響43-45
• 2.3 SF對于醌蛋白的作用45
• 3 討論45-47
• 第四章.左旋多巴對于離體腦片多巴胺細胞和5-羥色胺細胞的毒性作用47-55
• 前言47
• 1 材料與方法47-50
• 1.1 實驗材料47-48
• 1.2 實驗方法48-50
• 2 結果50-53
• 2.1 左旋多巴對離體腦片多巴胺細胞的損傷50-52
• 2.2 左旋多巴對離體腦片5-羥色胺細胞的毒性影響52-53
• 2.3 離體中縫核腦片醌蛋白檢測53
• 3 討論53-55
• 全文小結55-56
• 參考文獻56-65
• 致謝65

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前6條

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  本文關鍵詞：帕金森病腦片模型的建立及多巴胺醌的毒性作用及清除途徑研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：286253