發(fā)布時間：2017-04-04 13:14

  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲新基因TgIMP1的生物信息學(xué)分析、克隆及表達，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：剛地弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,可感染種類繁多的哺乳動物和人類。一般情況下,成年人感染弓形蟲不會有太明顯癥狀；而對于先天免疫系統(tǒng)有缺陷、或者進行器官移植手術(shù)的患者,感染弓形蟲便可能會引起多種并發(fā)疾病,而且有可能致人死亡。弓形蟲感染孕婦后,孕婦可將病原體可傳染給胎兒,導(dǎo)致胎兒智力發(fā)育不全,甚至導(dǎo)致胎兒畸形、胎兒死亡等。家畜被弓形蟲感染后,也會引發(fā)多種病癥甚至死亡,造成經(jīng)濟上的嚴(yán)重?fù)p失。 核酸疫苗作為一種新興的疫苗,具有操作簡便、免疫目的性較強、相對較為安全而被高度重視。近年來,針對弓形蟲病的DNA疫苗的研究取得大量的進展,然而,幾乎沒有一種疫苗可以徹底地預(yù)防和控制寄生蟲病。 本研究分析鑒定了一種新型的弓形蟲蛋白,名為'immune mapped protein1'(TgIMP1)。該類蛋白首先由Blake, D. P.等在愛美耳球蟲屬發(fā)現(xiàn),并對抗愛美耳球蟲感染有一定的保護性,其同源體蛋白也存在于剛地弓形蟲和新孢子蟲體內(nèi)。Blake, D.P等認(rèn)為這些寄生蟲的保護性抗原具有一些共有的特性,因此,我們有理由推斷,弓形蟲體內(nèi)的IMP1蛋白(TgIMP1)也具有抗弓形蟲感染的能力。 我們運用多種生物信息學(xué)方法預(yù)測了該蛋白的物化特性、信號肽位點、跨膜結(jié)構(gòu)域、抗原性、高級結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TgIMP1基因ORF全長1,697bp,編碼一個含400個氨基酸的蛋白質(zhì),該蛋白含有多個翻譯后修飾位點、親水性區(qū)域、跨膜序列及淋巴B細(xì)胞抗原表位,這從理論上確定了TgIMP1具有潛在的免疫原性,是一種潛在的抗弓形蟲病候選基因。然后,我們通過PCR方法擴增出目的基因,將其與克隆載體相連,形成重組質(zhì)粒,并用PCR、雙酶切、測序等方法對重組質(zhì)粒進行鑒定。而后,我們將TgIMP1基因插入真核表達載體pBudCE4.1,形成重組真核表達質(zhì)粒pBudCE4.1-TgIMP1,經(jīng)雙酶切、PCR等方法鑒定后,pBudCE4.1-TgIMP1被轉(zhuǎn)入人體成纖維細(xì)胞HFF中進行表達。我們通過RT-PCR等技術(shù)對其表達情況進行鑒定。實驗結(jié)果說明我們成功構(gòu)建了pBudCE4.1-TgIMP1真核表達載體,并在HFF細(xì)胞中實現(xiàn)成功表達。 我們的研究不僅從理論上證明了TgIMP1具有抗原性和免疫保護性,也不僅從技術(shù)上證明了其作為抗弓形蟲病核酸疫苗的可行性,同時還引入了一種新的方法——生物信息學(xué)分析法于弓形蟲的研究中,為以后弓形蟲免疫方面的研究做好鋪墊。
【關(guān)鍵詞】：弓形蟲 TgIMP1 生物信息學(xué) 克隆 表達
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R382.5;Q78
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符號說明10-12
• 前言12-17
• 第一部分 弓形蟲TgIMP1基因的生物信息學(xué)分析17-29
• 材料與方法17-19
• 結(jié)果19-28
• 討論28-29
• 第二部分 弓形蟲TgIMP1基因真核表達載體的構(gòu)建與表達29-55
• 材料與方法29-46
• 結(jié)果46-53
• 討論53-55
• 參考文獻55-60
• 附圖60-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63-64
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲新基因TgIMP1的生物信息學(xué)分析、克隆及表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：285589