本文關(guān)鍵詞：人源KGF-2基因的克隆、表達，純化及其活性的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：皮膚是人機體最重要免疫器官之一，其損傷的修復(fù)是一個非常復(fù)雜的過程,由多種生長因子及細胞因子介導(dǎo)。人纖維細胞生長因子（FGF）超家族是參與結(jié)締組織生長、皮膚愈合的主要因子，人角質(zhì)細胞因子-2（KGF-2）是該超家族成員之一。KGF-2對多種因素如急慢性炎癥、潰瘍、物理化學(xué)燒傷等引起的組織器官損傷的修復(fù)過程發(fā)揮重要作用，并且在整個脊椎動物的胚胎發(fā)育過程中起著不可替代的作用，參與并調(diào)控多種組織和器官的形成和分化。因此KGF-2有著很好的應(yīng)用前景，在臨床上可以用于治療多種表皮損傷相關(guān)疾病。 本文的主要研究內(nèi)容為成功構(gòu)建了KGF-2重組高效表達載體；通過初步發(fā)酵條件優(yōu)化，獲得了穩(wěn)定高表達的工程菌株；經(jīng)過純化工藝摸索及優(yōu)化，得到穩(wěn)定簡便且獲得高純度蛋白的純化工藝，具有極大的應(yīng)用價值。純化后的蛋白經(jīng)過活性檢測，具有一定的生物學(xué)活性，為以后的科研應(yīng)用打下了堅實的基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1.通過優(yōu)化密碼子，成功構(gòu)建了pET-30a(+)-hKGF2重組表達載體，通過表達條件的優(yōu)化獲得高效、可溶性表達的KGF-2重組蛋白。 2.通過確定培養(yǎng)基配方、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)pH等發(fā)酵主要條件進行工藝參數(shù)優(yōu)化，在此基礎(chǔ)上進一步確立了高密度發(fā)酵條件。 3.建立了適合放大的純化工藝路線，，確立了簡便快捷可線性放大的純化工藝，通過高壓破菌、Heparin親和層析、超濾脫鹽及DEAE陰離子層析方法，得到了高純度的目標(biāo)蛋白。 4. rhKGF-2對體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細胞的生長有非常顯著的促進作用,在3D氣液培養(yǎng)體系中亦可促進組織工程皮膚表皮中角質(zhì)形成細胞的生長及分化。
【關(guān)鍵詞】：KGF-2 皮膚損傷疾病 工藝優(yōu)化 細胞生長
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一部分 前言9-13
• 第二部分 重組人角質(zhì)細胞生長因子-2 的克隆和表達13-21
• 1. 材料與設(shè)備13-14
• 1.1 材料13-14
• 2. 方法14-19
• 2.1 KGF-2 基因的獲得14
• 2.2 克隆載體的構(gòu)建14-17
• 2.3 重組質(zhì)粒的鑒定17-19
• 3. 討論19-21
• 第三部分 重組人角質(zhì)細胞生長因子-2 的表達及純化21-32
• 1. 材料與方法21-24
• 1.1 菌株21
• 1.2 主要試劑及材料21-22
• 1.3 層析柱、填料及超濾膜包22
• 1.4 主要儀器設(shè)備22
• 1.5 發(fā)酵用培養(yǎng)基22-23
• 1.6 純化用緩沖液23
• 1.7 方法23-24
• 2. 結(jié)果與討論24-32
• 2.1 發(fā)酵條件優(yōu)化24-28
• 2.2 純化條件摸索28-31
• 2.3 討論31-32
• 第四部分 rhKGF-2 對三維氣液培養(yǎng)中組織工程皮膚表皮生長的作用32-39
• 1. 材料與方法32-35
• 1.1 實驗材料32
• 1.2 主要藥品試劑32
• 1.3 主要儀器設(shè)備32-33
• 1.4 主要溶液配制33
• 1.5 實驗方法33-35
• 2. 結(jié)果與討論35-38
• 2.1 人 KC 及人成纖維細胞體外培養(yǎng)35-36
• 2.2 rhKGF-2 對體外培養(yǎng) KC 的促增殖作用36
• 2.3 rhKGF-2 對 3D 氣液培養(yǎng)組織工程皮膚表皮的作用36-38
• 3. 討論38-39
• 本文總結(jié)39-40
• 參考文獻40-47
• 致謝47-48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王曉杰;周鑫;田海山;馬吉勝;焦悅;張睿;蔡敏倩;錢煥文;李校X;;重組人角質(zhì)細胞生長因子-2對兔堿燒傷模型角膜上皮損傷的治療作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年04期

  本文關(guān)鍵詞：人源KGF-2基因的克隆、表達，純化及其活性的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：283838