本文關(guān)鍵詞：IL-17A對(duì)GM-CSF誘導(dǎo)的骨髓樹突狀細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 用GM-CSF、LPS體外誘導(dǎo)小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞向樹突狀細(xì)胞(DC)分化及成熟,建立小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(BMDC)體外擴(kuò)增模型。在BMDC誘導(dǎo)分化及成熟的不同階段加入不同濃度的rmIL-17,探討IL-17A對(duì)BMDC分化及成熟的影響。 方法： 為建立小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(BMDC)體外擴(kuò)增模型,取6-8周的Balb/c小鼠的脛骨和股骨,用RPMI-1640培養(yǎng)基反復(fù)沖洗骨髓腔,裂解紅細(xì)胞獲得骨髓單個(gè)核細(xì)胞。制備2×106細(xì)胞/ml加入含200U/mlGM-CSF10%胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液培養(yǎng)8天,每隔3天補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液。收獲懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,用磁珠分選技術(shù)純化CDllc+細(xì)胞。純化細(xì)胞加入LPS刺激繼續(xù)培養(yǎng)36h使其充分成熟。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC Ⅱ的表達(dá),采用ELISA方法檢測(cè)BMDC培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-12p40、IL-10、IL-6及TNF-α的分泌。為了進(jìn)一步探討IL-17A在BMDC分化及成熟過程中的作用,在用GM-CSF誘導(dǎo)BMDC分化時(shí),分別加入低濃度及高濃度的rmIL-17A(10ng/ml、100ng/ml),8天后收獲懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,分離純化的CD11c+細(xì)胞加入LPS及／或不同濃度的rmIL-17A(50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml)繼續(xù)培養(yǎng)24h。利用流式細(xì)胞技術(shù)和ELISA方法分別檢測(cè)細(xì)胞表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC II的表達(dá)量以及細(xì)胞因子IL-12p40和IL-10的分泌。 結(jié)果： 小鼠骨髓來源的單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)GM-CSF誘導(dǎo)6-8天后細(xì)胞大量增殖并呈典型的DC細(xì)胞形態(tài)。LPS能夠有效的刺激GM-CSF誘導(dǎo)分化BMDC的成熟,表現(xiàn)為BMDC表面共刺激分子CD40、CD80和CD86的表達(dá)明顯高于不加LPS刺激組；細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-12p40、IL-10、IL-6和TNF-a的分泌量較不加LPS刺激組顯著增加。為了探索IL-17A對(duì)BMDC前體表型和分化的影響,分離獲得BMDC前體細(xì)胞,加入低濃度rmIL-17A(10ng/ml)或高濃度rmIL-17A(100ng/ml)聯(lián)合GM-CSF培養(yǎng)8天。結(jié)果顯示：IL-17A能夠促進(jìn)GM-CSF誘導(dǎo)的BMDC表面共刺激分子CD40、CD86和MHCII的表達(dá),且具有一定的劑量依賴性。為了證實(shí)IL-17A能否對(duì)已分化BMDC的成熟產(chǎn)生影響,我們向GM-CSF誘導(dǎo)8天的BMDC中加入不同濃度的rmIL-17A(50,100或者500ng/m1)繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)36小時(shí)。結(jié)果顯示,與不加rmIL-17A的對(duì)照組比較,加入不同濃度的IL-17A及各濃度rmIL-17A組之間BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC Ⅱ的表達(dá)量均沒有明顯變化,且各組培養(yǎng)上清中IL-12p40和IL-10的含量沒有明顯變,提示IL-17A不具有刺激已分化的BMDC成熟的功能。但在GM-CSF誘導(dǎo)BMDC分化過程中加入不同濃度的rmIL-17A,能夠上調(diào)LPS刺激的BMDC共刺激分子CD80、CD86和MHC Ⅱ的的表達(dá)及細(xì)胞因子IL-12p40和IL-10的分泌,提示BMDC誘導(dǎo)分化過程中加入IL-17A促進(jìn)LPS刺激的BMDC的成熟。 結(jié)論 一定劑量的GM-CSF能夠誘導(dǎo)骨髓來源的單個(gè)核細(xì)胞分化為DC,LPS能夠刺激GM-CSF誘導(dǎo)分化BMDC的成熟。成功建立了小鼠BMDC體外擴(kuò)增模型,為研究IL-17A對(duì)BMDC的影響提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 IL-17A能夠促進(jìn)GM-CSF誘導(dǎo)的BMDC前體表面共刺激分子的表達(dá),對(duì)BMDC前體表型的發(fā)展有促進(jìn)作用,并且具有一定的劑量依賴性；IL-17A不能促進(jìn)充分分化的BMDC表面分子的表達(dá)及細(xì)胞因子的分泌,即IL-17A對(duì)充分分化的BMDC的成熟無影響；BMDC誘導(dǎo)分化過程中加入IL-17A能夠促進(jìn)LPS刺激的BMDC的成熟。
【關(guān)鍵詞】：骨髓來源樹突狀細(xì)胞(BMDC) IL-17A GM-CSF DC共刺激分子 IL-12p40 IL-10
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號(hào)說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-15
• 對(duì)象和方法15-22
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 1.1 主要試劑15-16
• 1.2 主要儀器和設(shè)備16
• 1.3 主要試劑的配制16-18
• 1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-22
• 2.1 小鼠BMDC的分離和培養(yǎng)18-19
• 2.2 CD11c免疫磁珠分離提純成熟BMDC19
• 2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)成熟BMDC表面分子19-20
• 2.4 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子分泌20-21
• 2.5 統(tǒng)計(jì)分析21-22
• 結(jié)果22-36
• 1 小鼠骨髓來源的DC體外擴(kuò)增方法的建立22-29
• 1.1 BMDC的形態(tài)22-25
• 1.2 BMDC的表型分析25-28
• 1.3 BMDC細(xì)胞因子分泌28-29
• 2 IL-17A對(duì)小鼠BMDC的調(diào)節(jié)作用29-36
• 2.1 IL-17A促進(jìn)BMDC前體表型的分化29-31
• 2.2 IL-17A對(duì)充分分化BMDC的成熟無影響31-33
• 2.3 BMDC誘導(dǎo)分化過程中加入IL-17A促進(jìn)LPS刺激的BMDC的成熟33-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 綜述46-56
• 綜述參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉鐵鋼;基于肺與胃腸相關(guān)理論探討銀萊湯對(duì)食積肺炎動(dòng)物模型腸黏膜屏障作用機(jī)制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 盧娉霞;樹突狀細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中的作用研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：IL-17A對(duì)GM-CSF誘導(dǎo)的骨髓樹突狀細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：282400